[发明专利]一种用于猪流行性腹泻的RNA疫苗及其构建方法

权利要求书

1.一种用于猪流行性腹泻的RNA疫苗，其特征在于，所述RNA疫苗为采用含有5’UTR、猪流行性腹泻病毒的S蛋白、终止密码子、3’UTR以及polyA核酸的序列合成。

2.由权利要求1所述的用于猪流行性腹泻的RNA疫苗，其特征在于，所述疫苗还包括纳米脂质颗粒，所述纳米脂质颗粒包裹RNA疫苗。

3.由权利要求1所述的用于猪流行性腹泻的RNA疫苗，其特征在于，所述5’UTR、3’UTR的序列选取自猪源的猪血红蛋白或猪白蛋白，所选序列的同源性在50％～100％。

4.由权利要求1所述的用于猪流行性腹泻的RNA疫苗，其特征在于，所述5’UTR、3’UTR包括三组序列，其核酸序列分别如序列表SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的三组。

5.由权利要求1所述的用于猪流行性腹泻的RNA疫苗，其特征在于，所述RNA疫苗的核酸序列包括如序列表SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11所示。

6.由权利要求1所述的用于猪流行性腹泻的RNA疫苗，其特征在于，所述终止密码子，为TGA、TAA、TAG的自由组合，个数为1-10个。

7.由权利要求1所述的用于猪流行性腹泻的RNA疫苗，其特征在于，所述polyA中的碱基A的个数为1-200个。

8.一种权利要求1～7任一项所述的用于猪流行性腹泻的RNA疫苗的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

选取5’UTR、3’UTR、S蛋白、终止密码子、polyA核酸序列合成RNA疫苗的核酸序列构建于载体上，转染到细菌得到重组菌，将重组菌进行质粒提取得到重组质粒，将重组质粒进行酶切、转录、纯化得到RNA疫苗核酸。

9.由权利要求8所述的所述的用于猪流行性腹泻的RNA疫苗的构建方法，其特征在于，所述RNA疫苗还包括脂质纳米颗粒，所述脂质纳米颗粒的制备原料包括聚合物PEG_5k-b-PLGA_11k、PLGA_11k和BHEM-Chol。

10.由权利要求9所述的所述的用于猪流行性腹泻的RNA疫苗的构建方法，其特征在于，所述脂质纳米颗粒包裹RNA疫苗的操作为：将RNA疫苗核酸溶液与BHEM-Chol、PEG_5k-b-PLGA_11k、PLGA_11k混合，超声得到油相-水相的初乳液，加入无核酸酶水再超声乳化得到水相-油相-水相的复乳液，将复乳液中的有机溶液去除，浓缩，即得到脂质纳米颗粒包裹的RNA疫苗。