[发明专利]一种IL-4基因缺失斑马鱼在审
| 申请号： | 202110479854.2 | 申请日： | 2021-04-29 |
| 公开（公告）号： | CN113151276A | 公开（公告）日： | 2021-07-23 |
| 发明（设计）人： | 袭细毛 | 申请（专利权）人： | 广州博识生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/55;C12N15/89;A01K67/027 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 510630 广东省广州市天河*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 il 基因 缺失 斑马 | ||
【权利要求书】：
1.一种IL-4基因缺失斑马鱼的应用，其特征在于，将IL-4基因缺失斑马鱼用于免疫相关疾病的研究，所述的IL-4基因缺失斑马鱼制备过程包括以下步骤：
1)CRISPR/Cas9基因敲除靶位点设计
在NCBI上查询斑马鱼IL-4基因序列，根据CRISPR/Cas9敲除原理设计靶位点，靶位点序列为：5’-GACCTGAAGATCTCAACATC-3；
2)设计Oligo序列，根据靶位点设计Oligo序列，所述的Oligo序列为5’-ACCGGACCTGAAGATCTCAACATCG-3’，5’-AAACGATGTTGAGATCTTCAGGTCG-3’；
3)构建sgRNA体外转录载体；
4)sgRNA体外转录、纯化及鉴定；
5)制备Cas9 mRNA；
6)制备F0代斑马鱼；
7)将F0胚胎饲养至性成熟；
8)与野生型成鱼外交，筛选F0；
9)选取可产生有效突变的F0自交，筛选F1；
10)从F1代突变体中挑选相同突变的雌鱼和雄鱼，杂交得到F2代；
11)筛选IL-4基因敲除纯合子即为稳定遗传的IL-4基因缺失斑马鱼。
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