[发明专利]D-氨基酸氧化酶突变体及其在制备L-草铵膦中的应用

权利要求书

1.一种D-氨基酸氧化酶突变体，其中，当与包含SEQ ID NO.1所示序列的D-氨基酸氧化酶的氨基酸序列比对时，所述D-氨基酸氧化酶突变体的氨基酸序列包含对应于第62位和/或第226位的氨基酸残基的替换，所述第62位和第226位是参照SEQ ID NO.1限定的，并且所述D-氨基酸氧化酶突变体的氨基酸序列与SEQ ID NO.1所示序列具有至少90％的同一性。

2.根据权利要求1所述的D-氨基酸氧化酶突变体，其中第226位的氨基酸残基的替换为M226T；优选的，第226位的氨基酸残基的替换为M226T，第62位的氨基酸残基的替换为F62K。

3.根据权利要求1或2所述的D-氨基酸氧化酶突变体，其来源于Microbotryumintermedium。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的D-氨基酸氧化酶突变体，其氨基酸序列与SEQ IDNO.1所示序列具有至少99％的同一性。

5.核酸，其包含编码权利要求1至4中任一项所述的D-氨基酸氧化酶突变体的序列。

6.表达载体，其包含权利要求5所述的核酸。

7.重组宿主细胞，其包含权利要求5所述的核酸或者权利要求6所述的表达载体。

8.根据权利要求7所述的重组宿主细胞，其中所述宿主细胞属于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolitica)、克鲁斯假丝酵母(Candida krusei)、东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis)、放线菌(Actinomycetes)、链霉菌(Streptomyces)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)或大肠杆菌(Escherichiacoli)中的一种。

9.权利要求1至4中任一项所述的D-氨基酸氧化酶突变体、权利要求5所述的核酸、权利要求6所述的表达载体、或者权利要求7-8任一项所述的重组宿主细胞在制备L-草铵膦中的用途。

10.一种制备L-草铵膦的方法，其包括在酶催化体系的存在下使D-草铵膦发生转化反应生成L-草铵膦，其中所述酶催化体系包括用于将D-草铵膦转化为2-羰基-4-[羟基(甲基)膦酰基]丁酸的权利要求1至4中任一项所述的D-氨基酸氧化酶突变体；特别地，所述D-草胺膦最初存在于D-和L-草胺膦或其盐的外消旋混合物中。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述酶催化体系还包含用于将2-羰基-4-[羟基(甲基)膦酰基]丁酸转化为L-草铵膦的L-氨基酸脱氢酶。

12.根据权利要求10或11所述的方法，其中所述酶催化体系还包括过氧化氢酶。

13.根据权利要求10至12中任一项所述的方法，其中所述酶催化体系还包括辅酶循环系统，所述辅酶循环系统选自以下中的至少一种：

(1)甲酸脱氢酶辅酶循环系统：包括甲酸脱氢酶，甲酸盐和辅酶；

(2)葡萄糖脱氢酶辅酶循环系统：包括葡萄糖脱氢酶，葡萄糖和辅酶；

(3)醇脱氢酶辅酶循环系统：包括醇脱氢酶，异丙醇和辅酶。

14.根据权利要求10至13中任一项所述的方法，其中所述酶催化体系中的每种酶的形式各自独立地选自：游离酶和表达酶的重组宿主细胞。