[发明专利]一种检测EGFR基因G719S突变的系统

说明书

本发明涉及分子诊断技术领域，具体涉及一种检测EGFR基因G719S突变的系统，包括微流控芯片和PCR扩增体系；所述微流控芯片包括设有若干用于进行PCR反应的微腔室的PDMS腔室层；所述PDMS腔室层的原料包括PDMS预聚体和Triton X‑100；所述PCR扩增体系包括牛血清白蛋白。本方案解决了现有检测技术灵敏度有限且操作繁琐的技术问题。本技术在检测稀有基因突变方面具有非常突出的优势，可高敏特异地检测游离核酸的突变位点，同时该技术还具有成本低廉、快速判读、操作较易等优点。本方案可以应用于检测EGFR基因G719S突变的实践操作中，为分子靶向的肺癌精准医疗和诊断创造条件。

技术领域

本发明涉及分子诊断技术领域，具体涉及一种检测EGFR基因G719S突变的系统。

背景技术

肺癌(Lung Cancer)是世界主要的恶性肿瘤之一，全球每年新发病例高达160万余人次，患者5年生存率仅为16～23％，发病率逐年递增，严重威胁人类生命财产安全。随着精准医疗的兴起和技术进步，以分子靶向治疗为代表的肺癌精准医疗近年来异军突起；逐渐成为治疗的一线新选择。生物靶向治疗和诊断可对肺癌进行深层次分子分型，从而实现精准化治疗。与肺癌精准医疗密切相关的靶点有表皮生长因子受体(Epidermal GrowthFactor Receptor，EGFR)，约40％的亚洲非小细胞肺癌(NSCLC)患者存在EGFR突变，G719S就是其中之一，EGFR的G719S占EGFR突变的15％。

目前，存在多种多样的肺癌分子分型和位点突变检测技术，主流方法有直接测序法、液相色谱、高分辨率熔解曲线法、扩增阻遏突变技术和免疫组化等。这些技术在基因突变检测中能发挥各自优势，但也存在种种不足。如测序法最为精准，是“金标准”，但存在操作繁琐、分析复杂、费用高昂等缺陷；液相色谱灵敏度不足，难以达到精准的要求；免疫组化在临床应用最为广泛，但费时费力且试剂有一定毒性；其他方法也存在诸如背景信号强、信号干扰或通量不高的缺点。因此，亟需开发一种操作较为简易、费用低廉、灵敏特异的靶向基因突变检测的新技术和新体系。

发明内容

本发明意在提供一种检测EGFR基因G719S突变的系统，以解决对基因突变的现有的检测技术的灵敏度有限且操作繁琐的技术问题。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种检测EGFR基因G719S突变的系统，包括微流控芯片和PCR扩增体系；所述微流控芯片包括PDMS腔室层，所述PDMS腔室层设有若干用于进行PCR反应的微腔室；所述PDMS腔室层的原料包括PDMS预聚体和Triton X-100；所述PCR扩增体系包括牛血清白蛋白。

本方案的原理及优点是：在含有EGFR基因G719S点突变的样本中，微量突变DNA与大量野生型DNA共存，导致常规的方法很难将微量的突变基因检测出来。本方案使用数字聚合酶链式反应(数字PCR)的方法来检测EGFR基因G719S点突变，即采取“分而治之”的策略，通过将试样均匀分解或分隔为大量的反应单元(即将PCR扩增体系分解到微腔室中)，直至每个微腔室中平均有一个或零个靶标分子，从而有效地避免了常规PCR扩增体系下，由于微量突变DNA与大量野生型DNA共存而导致微量突变DNA的扩增受到抑制无法检测到的情况。在数字PCR扩增体系下，当所有分隔的反应单元同时进行扩增后，含有靶标分子的单元将会因靶标分子扩增产生阳性信号，而不含靶标分子的单元则没有信号，最后通过对阳性信号进行统计计数，并根据泊松分布公式计算，可以推算出样品的原始浓度或靶标分子含量。该技术为一种绝对定量技术，可确定低至单拷贝的待测靶分子的绝对数目。因此该技术在检测稀有基因突变方面具有非常突出的优势，可高敏特异地检测循环游离核酸的靶向基因突变位点，同时该技术还具有成本低廉、快速判读、操作较易等优点。