[发明专利]α-淀粉酶测定试剂球的制备方法、试剂球及微流控芯片

说明书

本发明实施例涉及医学检测技术领域，尤其涉及一种α‑淀粉酶测定试剂球的制备方法、试剂球及微流控芯片，该方法通过调整混合液的PH值至预设值后，将混合液的液滴滴在液氮中，以使液滴形成冰球，将冰球进行冷冻干燥制得α‑淀粉酶测定试剂球，其中，该混合液包括以下组分：缓冲液40‑200mmol/L，金属离子稳定剂20‑200mmol/L，氯化钙1‑10mmol/L，α‑葡萄糖苷酶10‑100KU/L，4,6‑亚乙基‑α,D‑麦芽七糖苷‑对硝基酚0.1‑10g/L，稳定剂0.1‑10g/L，赋形剂10‑100g/L。其中，金属离子稳定剂作为α‑葡萄糖苷酶的稳定剂，可以提高试剂球的稳定性，氯化钙使得α‑淀粉酶发挥活性，有利于试剂球在检测过程中与检测样本充分反应，以提高检测准确性，此外，该剂量范围的赋形剂和稳定剂能够保证试剂球的形态及复融溶解性。

技术领域

本发明实施例涉及医学检测领域，尤其涉及一种α-淀粉酶测定试剂球的制备方法、试剂球及微流控芯片。

背景技术

α-淀粉酶(α-amylase，简称AMS或AMY)是一类能将淀粉分子水解的酶，在胰腺和唾液腺中含量丰富，胰淀粉酶由胰腺以活性状态排入消化道，是最重要的水解碳水化合物的酶，胰淀粉酶与唾液腺分泌的淀粉酶同样属于α-淀粉酶。当罹患胰腺疾病或有胰腺外分泌功能障碍时可引起α-淀粉酶活性升高或降低，因此，测定血清中的α-淀粉酶浓度对胰腺炎的诊断具有重要意义。

目前，国际临床化学联合会(IFCC)批准了以亚乙基封闭的G7-pNP作为底物的酶偶联法(EPS法)作为临时推荐方法，然而市面上大多数基于pNP-G7的α-淀粉酶试剂盒稳定性欠佳、易受样本中蛋白浓度及离子强度影响，且依赖大型全自动生化分析仪，难以进行快速、准确的诊断。虽然，现有用于检测其它项目的冻干试剂球，但是，现有的冻干试剂球形态较差，难以完全冻干，导致其具有较低的稳定性和准确性。

发明内容

本发明实施例主要解决的技术问题是提供一种α-淀粉酶测定试剂球的制备方法、试剂球及微流控芯片，采用该方法制备得到的试剂球具有较好的形态及复融溶解性，并具有较高的稳定性和精密度。

为解决上述技术问题，第一方面，本发明实施例中提供了一种α-淀粉酶测定试剂球的制备方法，包括：

将缓冲液、金属离子稳定剂、氯化钙、α-葡萄糖苷酶、4,6-亚乙基-α,D-麦芽七糖苷-对硝基酚、稳定剂、赋形剂和水混合形成混合液，并调整所述混合液的PH值至预设值；

将所述混合液的液滴滴在液氮中，以使所述液滴形成冰球；

将所述冰球进行冷冻干燥制得所述α-淀粉酶测定试剂球；

其中，所述混合液包括以下组分：缓冲液40-200mmol/L，金属离子稳定剂20-200mmol/L，氯化钙1-10mmol/L，α-葡萄糖苷酶10-100KU/L，4,6-亚乙基-α,D-麦芽七糖苷-对硝基酚0.1-10g/L，稳定剂0.1-10g/L，赋形剂10-100g/L。

在一些实施例中，将所述缓冲液、金属离子稳定剂、氯化钙、α-葡萄糖苷酶、4,6-亚乙基-α,D-麦芽七糖苷-对硝基酚、稳定剂、赋形剂和水混合形成混合液，并调整所述混合液的PH值至预设值，包括：

将所述缓冲液加入第一预设定量的水中；

待所述缓冲液在所述水中完全溶解后，依次加入所述金属离子稳定剂、所述氯化钙、所述α-葡萄糖苷酶、所述4,6-亚乙基-α,D-麦芽七糖苷-对硝基酚，得到第一溶液，并调节所述第一溶液的PH值至所述预设值，其中，所述预设值的范围为6.5-7.5；

将所述赋形剂、所述稳定剂加入所述第一溶液中，并将第二预定量的水加入所述第一溶液中，得到第三预设定量的所述混合液。

在一些实施例中，所述赋形剂包括甘露醇、肌醇、PEG3350、PEG8000、聚乙烯吡咯烷酮中的至少一种。