[发明专利]检测PKD1变异单精子的引物组合物、产品及方法

权利要求书

1.一种检测PKD1变异单精子的引物组合物、产品及方法引物组合物，其特征在于,所述引物组合物包括可特异扩增PKD1基因及其上下游2Mb范围内紧密连锁的单核苷酸多态性SNP位点所在区域。

2.根据权利要求1所述的引物组合物，其特征在于，所述PKD1基因为人类可特异扩增PKD1基因。

3.根据权利要求1所述的引物组合物，其特征在于，所述可特异扩增PKD1基因的上下游序列为1-216的全部引物对。

4.根据权利要求3所述的引物组合物，其特征在于，所述可特异扩增PKD1基因上下游2Mb范围内SNP所在区域引物的上下游序列为1-216的全部引物对。

5.根据权利要求4所述的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括SEQ ID NO：1-216的全部引物对。

6.根据权利要求5所述的引物组合物，其特征在于，所述全部引物对在目标染色体上序列唯一,位置特异的寡核苷酸具有相同的退火温度。

7.一种胚胎植入前的检测产品，其特征在于，所述检测产品由上述权利要求1-6之一所述的引物组合物制备而成。

8.根据权利要求7所述的检测产品，其特征在于，所述检测产品为检测试剂盒。

9.根据权利要求8所述的检测产品，其特征在于，所述检测试剂盒包括：

用于文库构建的反应试剂，包括：特异性结合引物、通用PCR引物、多重PCR聚合酶、DNA连接酶、末端修复酶、dNTPs和反应缓冲液；

用于纯化PCR的反应产物的试剂，包括产物纯化磁珠及缓冲液；

阴性质控品和阳性质控品。

10.一种胚胎植入前的检测方法，通过上述权利要求7-9之一所述的检测产品实现，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

S1：查找PKD1基因及其上下游2M内的SNP位点，针对PKD1基因全部CDS区域及上下游2M内的SNP位点进行引物设计，引物组合物包括SEQ ID NO：1～216的全部引物对；

S2：提取男方、女方基因组DNA，获得单精子并进行全基因组扩增；

S3：采用高通量测序技术，对男方、女方及男方单精子的PKD1基因CDS区域及上下游2M内的SNP位点进行测序；

S4：在单精子中同男方相同的变异位点进行高通量测序及一代测序；

S5：单倍型的构建：分别用AA、BB、AB代表野生型纯合、变异型纯和和杂合三种类型，选取女方或男方基因型为AA或BB且男方或女方基因型为AB的位点进行分析，得出男方染色体在该区域的另一种单倍型。