[发明专利]非粒细胞减少人群肺部易感真菌病的检测试剂盒及其应用

说明书

本发明属于医学检测领域，具体涉及非粒细胞减少人群肺部易感真菌病检测试剂盒及其应用。本发明用于检测非粒细胞减少人群肺部易感真菌病的引物和探针，所述引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2；所述探针的核苷酸序列为SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4。本发明的引物和探针能够快速、精准的判断rs3816527的基因型，从而能够提前预防、治疗非粒细胞减少人群肺部易感真菌病，大大缩短了检测周期、检测成本。

技术领域

本发明属于医学检测领域，具体涉及非粒细胞减少人群肺部易感真菌病的检测试剂盒及其应用。

背景技术

真菌普遍存在于自然界，是最常见的机会致病菌之一。侵袭性真菌每年感染人数超过200万，约造成150万人死亡。人体肺部直接与外界相通，暴露于空气中，易受空气中的真菌感染，其中隐球菌和烟曲霉菌感染居肺部真菌病之首。之前的大多数研究专注于肺部真菌病对免疫受损人群的威胁，然而，非粒细胞减少患者的肺部真菌病亦不少见。在临床中，肺部真菌病患者症状及影像学特征常不典型，常因误诊而预后不佳。

正五聚蛋白3(PTX3)作为可溶性模式识别分子，识别真菌孢子，促进病原体被吞噬或杀伤、激活补体系统、调控炎症反应，在机体固有免疫系统抗真菌过程中发挥重要作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测非粒细胞减少人群肺部易感真菌病的引物和探针。

本发明的再一目的在于提供上述引物和探针的应用。

根据本发明具体实施方式的用于检测非粒细胞减少人群肺部易感真菌病的引物和探针，所述引物的核苷酸序列为

SEQ ID NO.1：5'-CGGGCTGCTAACGTGTGTG-3'；

SEQ ID NO.2：5'-CTCATCTGCGAGTTCTCCAGCA-3'；

所述探针的核苷酸序列为

SEQ ID NO.3：5'-CCGTGCGACTGCGGT-3'；

SEQ ID NO.4：5'-CCGTGCGCCTGCGGT-3'。

本发明采用MGB Taqman探针法进行非粒细胞减少人群rs3816527位点的基因型检测，TaqMan荧光探针是一种寡核苷酸探针，荧光基团连接在探针的5’末端，而淬灭剂则在3’末端。PCR扩增时，在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

根据本发明具体实施方式的用于检测非粒细胞减少人群肺部易感真菌病的引物和探针，所述探针的5’端标记荧光基团，所述探针的3’端标记淬灭基团。常用的荧光基团是FAM、TET、VIC、HEX；在3’端标记MGB能够大大提供探针的Tm值，因此设计的MGB探针可以更短，提高了特异性。

根据本发明具体实施方式的用于检测非粒细胞减少人群肺部易感真菌病的引物和探针，SEQ ID NO.3序列的5'端标记有6-FAM荧光染料，SEQ ID NO.3序列的3'端标记有淬灭基团MGB。

根据本发明具体实施方式的用于检测非粒细胞减少人群肺部易感真菌病的引物和探针，SEQ ID NO.4序列的5'端标记有VIC荧光染料，SEQ ID NO.4序列的3'端标记有淬灭基团MGB。