[发明专利]一种仿生纳米探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种仿生纳米探针，其特征在于，其为双重适配体金纳米粒子探针；所述的双重适配体分别为Sgc8和SYL3C；其序列分别为：Sgc8：5’thiol-C6-ATCTAACTGCTGCGCCGCCGGGAAAATACTGTACGGTTAGA-6-FAM；SYL3C：5’thiol-C6-TTTTTTTTTTCACTACAGAGGTTGCGTCTGTCCCACGTTGTCATGGGGGGTTGGCCTG-AMCA。

2.一种权利要求1所述仿生纳米探针的制备方法，其特征在于，包括步骤如下：

步骤1：将两种适配体加入标准金纳米粒子溶液中混匀，形成含适配体的金纳米粒子溶液；具体步骤为：

(1)平均粒径为30.2nm，浓度为58.5μg/mL的标准金纳米粒子溶液溶于水中形成水溶液，并经过短暂的超声分散，形成均匀分散的单颗粒金纳米粒子溶液，浓度为0.5～5nM；

(2)将第一种适配体在10000～13000rpm转速下离心50～75s，再用TE缓冲溶液配制为80～120μM的适配体工作液；

(3)将第二种适配体在10000～13000rpm转速下离心50～75s，再用TE缓冲溶液配制为80～120μM的适配体工作液；

(4)将装有第一种适配体的离心管置于89～95℃的水浴1.5～3min，随后逐步冷却至室温进行DNA链退火，使得适配体链充分展开，恢复其自身DNA结构；

(5)将装有第二种适配体的离心管置于89～95℃的水浴1.5～3min，随后逐步冷却至室温进行DNA链退火，使得适配体链充分展开，恢复其自身DNA结构；

(6)取5～10μL 80～120μM的退火后的第一种适配体加入到0.8～1.2mL 0.5～5nM的金纳米粒子溶液中，混匀，形成含有第一种适配体和标准金纳米粒子的混合溶液；

(7)取5～10μL 80～120μM的退火后的第二种适配体加入到步骤(6)中得到的混合溶液中，混匀，形成含有两种适配体以及标准金纳米粒子的混合溶液；

步骤2：将含适配体的金纳米粒子溶液置于-15～-30℃环境中1.5～2.5h，随后于室温下融解，形成双重适配体金纳米粒子探针。

3.根据权利要求2所述的一种仿生纳米探针的制备方法，其特征在于，所述步骤1中两种适配体分别为Sgc8和SYL3C；该两种适配体的序列分别为：Sgc8：5’thiol-C6-ATCTAACTGCTGCGCCGCCGGGAAAATACTGTACGGTTAGA-6-FAM；SYL3C：5’thiol-C6-TTTTTTTTTTCACTACAGAGGTTGCGTCTGTCCCACGTTGTCATGGGGGGTTGGCCTG-AMCA。

4.一种权利要求1所述仿生纳米探针的应用，其特征在于，所述的仿生纳米探针用于单循环肿瘤细胞的在线检测。

5.根据权利要求4所述的仿生纳米探针的应用，其特征在于，具体包括：

步骤1：将制得的双重适配体金纳米粒子探针引入电感耦合等离子体质谱仪中进行时间分辨模式检测；

步骤2：按照体积比为1:100～1:1的比例，向生物样品中加入制备好的双重适配体金纳米粒子探针，混合均匀形成样品-探针混合液，冰浴20～40min后，双重适配体金纳米粒子探针则识别修饰到生物样品中循环肿瘤细胞表面，形成初步处理后的生物样品；

步骤3：将步骤2中初步处理后的生物样品以750～1100rpm的转速，离心洗涤2.5～5min，得到纯净的样品；

步骤4：将步骤3中得到的样品的一部分引入电感耦合等离子体质谱仪中进行时间分辨模式的检测；

步骤5：将步骤3中得到的样品的另一部分引入细胞培养孔板中进行荧光成像分析；

步骤6：重复步骤4～步骤5，进行三次平行检测。