[发明专利]一种模块化多肽-AIE探针MP及其合成方法、包含其的试剂盒

说明书

本发明提供一种模块化多肽‑AIE探针MP的合成方法，包括以下步骤：将溴化亚铜和AIE分子PyTPA分别溶于二甲基亚砜中，得到溴化亚铜的二甲基亚砜溶液和PyTPA的二甲基亚砜溶液；将多肽溶于去离子水中，在氮气氛围下，加入溴化亚铜的二甲基亚砜溶液、PyTPA的二甲基亚砜溶液和抗坏血酸钠水溶液，恒温反应，得到粗产物；将粗产物进行高效液相色谱纯化，即得到模块化多肽‑AIE探针MP。利用本发明提供的模块化多肽‑AIE探针MP与滑动基底(SLIPS)上的纳米小球自组装成的光子晶体的组合策略，可以更加精准地定量化检测肿瘤标志物MMP‑2,具有检测时间短、灵敏度高、线性范围广、高通量同时检测等优势，对生物分析和疾病诊断有着重要的应用价值。

技术领域

本发明属于荧光分析和界面功能材料应用领域，具体涉及一种模块化多肽-AIE探针MP及其合成方法、包含其的试剂盒。

背景技术

基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase 2，MMP-2)广泛分布在生物体内，参与重要的生理过程，如降解和重塑细胞外基质、炎症、癌症发生等过程。MMP-2在肿瘤的发展过程中扮演着重要的角色，主要通过降解癌细胞周围环境中的基质，促进新生血管的形成及调节细胞之间黏附等作用来促使癌细胞的转移。目前，已经发现在很多癌症中的MMP-2呈现出高表达的状态，如乳腺癌、胃癌、肺癌、卵巢癌等。此外，大量的医学文献已经证明癌症患者血清中MMP-2、MMP-9与肿瘤的侵袭关系密切，可以用于肿瘤的诊断、鉴别、以及预后评估。

目前检测MMP-2的分析方法主要有比色法、化学发光、酶联免疫吸附测定、表面等离子体共振等。模块化多肽-AIE探针MP对MMP-2呈现出较高的特异性和灵敏度，还呈现出低的荧光背景信号和优异的光稳定性。在MMP-2的存在下，模块化多肽-AIE探针MP中的酶切单元被裂解，从而释放出亲水的多肽残基和AIE荧光团的残基，由于AIE分子的亲疏水的改变从而导致了AIE分子的聚集，开启了荧光信号。一方面，通过界面材料上的光子晶体的自组装，光子晶体中的慢光子效应可以选择性地提升有效荧光信号比；另一方面，样品溶液在滑动基底上的富集效应可以使AIE分子更加聚集在光子晶体表面，进一步放大荧光信号。此外，高通量微孔板的制备可以进一步使用该组合策略实现对MMP-2的高通量、高特异性、高灵敏度的检测。这种组合策略对生物分析、疾病诊断有着较大的应用前景和实用价值。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种MMP-2响应的模块化多肽-AIE探针MP，还提供了该模块化多肽-AIE探针MP的合成方法，以及利用该模块化多肽-AIE探针MP进行荧光检测的方法。

本发明提供一种模块化多肽-AIE探针MP，其结构式如式(Ⅰ)所示：

式Ⅰ中，AA表示精氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸中的任一种或多种的组合，n的取值为6-40。

本发明还提供了上述模块化多肽-AIE探针MP的合成方法，包括以下步骤：

S101，将溴化亚铜和AIE分子PyTPA分别溶于二甲基亚砜中，得到溴化亚铜的二甲基亚砜溶液和PyTPA的二甲基亚砜溶液；

S102，将多肽溶于去离子水中，在氮气氛围下，加入溴化亚铜的二甲基亚砜溶液、PyTPA的二甲基亚砜溶液和抗坏血酸钠水溶液，恒温反应，得到粗产物；

S103，将粗产物进行高效液相色谱纯化，即得到模块化多肽-AIE探针MP。

进一步地，所述多肽的序列为：N端-C端：(AA)_n-GG-PLGLAG-Pra-NH₂；AA表示精氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸中的任一种或多种的组合，n的取值为6～40。