[发明专利]一种模块化多肽-AIE探针MP及其合成方法、包含其的试剂盒有效
申请号: | 202110449871.1 | 申请日: | 2021-04-25 |
公开(公告)号: | CN113185578B | 公开(公告)日: | 2022-05-27 |
发明(设计)人: | 娄筱叮;吴风;黄羽;夏帆 | 申请(专利权)人: | 中国地质大学(武汉) |
主分类号: | C07K7/08 | 分类号: | C07K7/08;C07K1/107;C12Q1/37;G01N21/64 |
代理公司: | 武汉知产时代知识产权代理有限公司 42238 | 代理人: | 孔灿 |
地址: | 430000 湖*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 模块化 多肽 aie 探针 mp 及其 合成 方法 包含 试剂盒 | ||
1.利用模块化多肽-AIE探针MP荧光检测MMP-2的方法,所述方法不以诊断为目的,其特征在于,包括以下步骤:
S201,将对氨基苯汞乙酸盐和MMP-2样品溶液加入到TCNB缓冲液中,在37°C水浴中温和摇动孵育,得到活化的MMP-2样品;
S202,将活化的MMP-2样品和模块化多肽-AIE探针MP加入离心管中在37°C下孵育20~25min,之后在80°C下灭活3~5 min,向灭活后的MMP-2样品和模块化多肽-AIE探针MP的混合溶液中添加聚四苯乙烯制成的纳米小球,在基底上自组装完成后进行荧光测量;
其中,所述模块化多肽-AIE探针MP的合成方法包括以下步骤:
将溴化亚铜和AIE分子PyTPA分别溶于二甲基亚砜中,得到溴化亚铜的二甲基亚砜溶液和PyTPA的二甲基亚砜溶液;
将多肽溶于去离子水中,在氮气氛围下,加入溴化亚铜的二甲基亚砜溶液、PyTPA的二甲基亚砜溶液和抗坏血酸钠水溶液,恒温反应,得到粗产物;所述多肽的序列为:N端-C端:(AA)n-GG-PLGLAG-Pra-NH2;AA表示精氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸中的任一种或多种的组合,n的取值为6~40;
将粗产物进行高效液相色谱纯化,即得到模块化多肽-AIE探针MP,所述模块化多肽-AIE探针MP的结构式如式(Ⅰ)所示:
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式Ⅰ
使用的基底为光子晶体滑动基底或MMP-2高通量检测器件;光子晶体滑动基底的制备过程为:在干净的基材上镀一层平展的特氟龙薄膜,利用油相浸润,得到滑动基底;将光子晶体乳胶悬浮液缓慢滴加于滑动基底上,即得到光子晶体滑动基底;MMP-2高通量检测器件的制备过程为:利用冲压模具将特氟龙薄膜冲压成圆形薄膜;随后置于油相中浸泡使圆形的特氟龙薄膜附着一层油膜;然后将其填充在微孔板的底部,再将光子晶体乳胶悬浮液缓慢滴加于微孔板上,即得到MMP-2高通量检测器件。
2.根据权利要求1所述的利用模块化多肽-AIE探针MP荧光检测MMP-2的方法,其特征在于,所述油相为润滑油、硅油、机械油、聚酯或合成酯中的任一种;所述光子晶体乳胶悬浮液的浓度为0.0001 wt%~10 wt%。
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