[发明专利]一种基于LFD-RMA法检测人鼻病毒的引物探针组

说明书

本申请属于生物检测技术领域，具体为一种基于LFD‑RMA法检测人鼻病毒的引物探针组，包括检测人鼻病毒的引物对及对应的探针，所述下游引物的5’端用Biotin标记；探针的5’端用FAM标记，第33个碱基替换为THF(dSpacer)，3’末端被阻断基团C3‑spacer修饰；扩增产物大小不超过500bp。本发明的检测方法特异性强、灵敏度高，操作简便，检测时间短，能够快速且准确地鉴定人鼻病毒，具有很好的应用前景。

技术领域

本申请属于生物检测技术领域，具体为一种基于LFD-RMA法检测人鼻病毒的引物探针组。

背景技术

人鼻病毒(Human rhinovirus，HRV)属小RNA病毒科，是普通感冒的最主要病原体之一，大约有10％-20％的成年人感冒是由鼻病毒感染引起，而婴儿感冒有15％-30％是由鼻病毒导致。HRV感染具有自限性，但是有时会引起诸如哮喘、充血性心衰、支气管扩张，包囊纤维化等严重并发症，并且HRV多与其它呼吸道病毒合并感染，例如呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒、冠状病毒以及肠道病毒等。

目前HRV的检测方法有组织培养、血清抗体检测及实时荧光定量PCR等。其中，HRV分离是检测HRV感染的金标准，但由于其需要的细胞培养条件苛刻，而检出率较低，耗时较长，故不宜用于HRV的快速检测；由于人鼻病毒具有众多血清型，缺乏合适的交叉反应抗原，使得血清学方法检测人鼻病毒抗体受到很大限制；实时荧光定量PCR需要相关的昂贵仪器设备且需要有专业技术人员操作，因此在基层和现场的检测应用受到很大限制。而重组酶介导扩增(Recombinase Mediated Amplification,RMA)技术，是近年来发展出的一种敏感、特异、简便、快捷的等温核酸扩增技术，被认为是可替代PCR的核酸检测技术，主要依赖重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶三种酶。RMA反应可以在37～42℃进行，整个过程在30min内即可达到检测水平；且RMA可以与侧流层析技术(LFD)结合，既不要求特殊仪器设备，也无需复杂的样品处理，仅使用侧流层析试纸就可以通过肉眼观察结果。因此可实现HRV的快速检测。

本发明采用LFD-RMA法建立快速检测人鼻病毒的方法，为人鼻病毒的现场检测提供一种快速、简单、可靠的新方法。

发明内容

为了解决现有技术的问题，本申请提供了一种基于LFD-RMA法检测人鼻病毒的引物探针组本申请是通过下述方案实现的：

一种基于LFD-RMA法检测人鼻病毒的引物探针组，包括检测人鼻病毒的引物对及对应的探针，其中，引物和探针序列为：

HRV-F：

5’-CAGGAGGGAAGGATGGTAGAGAATGGGACACAG-3’；

HRV-R：

5’-[Biotin]TGCCAAACACTTTGATATCACTCGCTCCGGTTC-3’；

HRV-P：

5’-[FAM]TCACGATAACTTTCACAGGGTTGGGATCGGCA[dSpacer]ATTACATGTTCTATG[C3-spacer]-3’。

优选的，所述下游引物的5’端用Biotin标记；探针的5’端用FAM标记，第33个碱基替换为THF(dSpacer)，3’末端被阻断基团C3-spacer修饰；扩增产物大小不超过500bp。

一种基于LFD-RMA法检测人鼻病毒的试剂盒，该试剂盒中包括有：含有扩增反应试剂的检测管、缓冲液、醋酸镁、标准阳性质粒、无菌双蒸水、侧流层析检测试纸条。