[发明专利]一种检测BVDV、BCoV、BRV和IBRV的多重荧光定量PCR方法及试剂盒在审
| 申请号： | 202110441844.X | 申请日： | 2021-04-23 |
| 公开（公告）号： | CN113136455A | 公开（公告）日： | 2021-07-20 |
| 发明（设计）人： | 秦建华;高亚桃;李妍;史万玉;刘立元;王猛;郭姚蕊;刘胜丽;王传文;包永占;赵月兰 | 申请（专利权）人： | 河北农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 李兴林 |
| 地址： | 071000 *** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 bvdv bcov brv ibrv 多重 荧光 定量 pcr 方法 试剂盒 | ||
1.一种用于检测BVDV、BCoV、BRV和IBRV的多重SYBR Green I荧光定量PCR引物组，其特征在于，所述引物组包括4对引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.8所示。
2.根据权利要求1所述的引物组在检测BVDV、BCoV、BRV和IBRV的非疾病诊断目的或在制备BVDV、BCoV、BRV和IBRV检测试剂盒中的应用。
3.一种检测BVDV、BCoV、BRV和IBRV的非疾病诊断目的的多重SYBR Green I荧光定量PCR方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取样本核酸，并进行反转录；
(2)使用引物SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.8对步骤(1)中反转录得到的混合物以及4种病毒的阳性质粒分别进行多重荧光定量PCR扩增反应，得到PCR扩增曲线；
(3)根据步骤(2)中得到的扩增曲线进行结果分析。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中多重荧光定量PCR的扩增体系中各组分总浓度如下所示：Green qPCR SuperMix 12.5μL，各上、下游引物终浓度分别为0.2uM/uL，模板/质粒标准品2μL，用ddH2O补足25uL。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中多重荧光定量PCR的扩增程序为：95℃300s、95℃10s、57℃10s，72℃25s，共40个循环。
6.权利要求3-5任一项所述的方法在制备BVDV、BCoV、BRV和IBRV检测试剂盒中的应用。
7.一种检测BVDV、BCoV、BRV和IBRV的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的引物组。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包括BVDV、BCoV、BRV和IBRV阳性质粒。
9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包括荧光定量PCR所需的试剂。
10.权利要求7-9任一项所述试剂盒在BVDV、BCoV、BRV和IBRV检测中的非疾病诊断目的的应用。
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