[发明专利]一种假性慢病毒载体高效感染人脐带间充质干细胞的方法

权利要求书

1.一种假性慢病毒载体高效感染人间充质干细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

S1：传代培养人间充质干细胞，制备成单细胞状态的人间充质干细胞悬液；

S2：将所述人间充质干细胞与携带绿色荧光报告蛋白的假性慢病毒颗粒按数目比值先后加入EP管，制成小体积的细胞病毒混合液；

S3：培养箱悬浮培养1小时所述细胞病毒混合液，孵育期间定期吹打混匀所述细胞病毒混合液，进行短时间小体积悬浮感染；

S4：转移所述细胞病毒混合液至细胞培养皿，加入适量的人间充质干细胞培养基，使所述细胞病毒混合液达到最低限度培养液体积，即培养皿所需正常培养液量的60％，继续培养至感染完成。

S5：在使用该方法进行感染时，可在人间充质干细胞接触假性病毒颗粒期间添加促感染试剂。

2.根据权利要求1所述的假性慢病毒载体高效感染人间充质干细胞的方法，其特征在于：在S1中，所述传代培养人间充质干细胞指复苏低代数冻存的人脐带间充质干细胞后进行传代培养；所述制备单细胞状态的人间充质干细胞悬液指用工作浓度为0.25％的胰蛋白酶消化所述人脐带间充质干细胞。

3.根据权利要求1所述的假性慢病毒载体高效感染人间充质干细胞的方法，其特征在于：在S2中，所述人间充质干细胞为人脐带间充质干细胞；所述绿色荧光报告蛋白为ZsGreen绿色荧光蛋白。

4.根据权利要求1所述的假性慢病毒载体高效感染人间充质干细胞的方法，其特征在于：在S2中，所述人间充质干细胞和假性慢病毒颗粒的数目比值指间充质干细胞数:慢病毒颗粒数为1：20或1：80。

5.根据权利要求1所述的假性慢病毒载体高效感染人间充质干细胞的方法，其特征在于：在S2中，所述EP管为0.5ml锥形微量EP管；所述细胞病毒混合液的小体积量为60μL。

6.根据权利要求1所述的假性慢病毒载体高效感染人间充质干细胞的方法，其特征在于：在S3中，所述培养箱为37℃细胞培养箱；所述定期吹打混匀细胞病毒混合液指每隔12分钟用200μL枪头轻轻吹打3次。

7.根据权利要求1所述的假性慢病毒载体高效感染人间充质干细胞的方法，其特征在于：在S4中，所述培养皿所需正常培养液量为24孔细胞培养板的单个培养孔所需的500μL。

8.根据权利要求1所述的假性慢病毒载体高效感染人间充质干细胞的方法，其特征在于：在S4中，所述细胞病毒混合液继续培养时间为9小时或21小时。

9.根据权利要求1所述的假性慢病毒载体高效感染人间充质干细胞的方法，其特征在于：在S5中，所述促感染试剂为终浓度4μg/ml的Polybrene。