[发明专利]一种利用大豆肽聚集体与EGCG结合制备纳米颗粒的方法

说明书

本发明公开了一种利用大豆肽聚集体与EGCG结合制备纳米颗粒的方法，属于大豆蛋白产品开发领域，该方法包括以下步骤：(1)大豆分离蛋白的制备(2)大豆肽聚集体的制备(3)制备大豆肽聚集体‑EGCG复合纳米颗粒。本发明明确了大豆肽聚集体与EGCG复合的工艺，大豆肽聚集体‑EGCG纳米颗粒的研发将作为一种新型乳液稳定剂，为食品工业提供更加绿色健康的食品配料。并且确定了二者复合后的多肽复合物具有更高的生物功能，该纳米颗粒具有低成本，操作便捷，绿色健康的特点。

技术领域

本发明属于大豆蛋白产品开发领域，主要涉及一种利用大豆肽聚集体与EGCG结合制备纳米颗粒的方法

背景技术

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)是绿茶中含量最丰富的儿茶素，也是已知的能够捕获大多数活性氧，如超氧化物、单线态氧、羟基自由基最有效的的茶多酚，EGCG除了具有较高的自由基清除能力外，还具有潜在的医学应用价值，如抗病毒、抗菌和治疗心血管疾病。此外，它也用作肿瘤多药耐药性的逆转剂，能够改善癌细胞对化疗的敏感性并减轻对心脏的毒性。EGCG与多肽主要通过疏水相互作用相互结合，产生生物功能较高的多肽复合物。

大豆蛋白是一种营养价值丰富的食用蛋白资源，由于其较高的蛋白含量及优良的功能特性，目前已被广泛地应用于食品加工。大豆多肽克服了大豆蛋白在营养学上的弱点,具有比大豆蛋白更丰富的营养和功能特性。大豆蛋白酶解产物拥有良好的溶解性、分散性、稳定性等理化性质，同时还具有多种生理功效，如抗氧化活性、降血压、降胆固醇、低抗原性以及免疫调节等，因此，大豆蛋白酶解肽具有诱人的开发前景。大豆肽聚集体已经成为有效的辅助制剂,在发酵工业中,大豆肽聚集体可以作为微生物的营养源,促进微生物生长和代谢；在食品工业中,大豆肽聚集体可以应用于焙烤食品、糖果糕点和冷饮食品中,既降低了成本,也改善了产品的风味、口感和组织状态等。

本发明通过一种利用大豆肽聚集体与EGCG结合制备纳米颗粒，一方面可以弥补大豆肽聚集体不溶性的缺陷，增加大豆蛋白水解利用率；另一方面，通过探究其在稳定乳液中的潜力，还为食品工业提供更加绿色健康的乳液稳定剂材料。

本研究的目的是通过与EGCG络合来进一步改善大豆肽聚集体的物理和化学性质。通过对大豆肽聚集物-EGCG复合纳米颗粒进行了超声处理，分析了它们的结构和功能特性，包括它们在稳定乳状液中的潜力。为蛋白质的水解领域的研究做出了贡献，并为大豆肽聚集体在食品工业中的进一步应用提供了基础。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，提供种利用茶多酚与多肽结合制备多肽复合物，达到提高酶解物得利用率；优化酶解物生物功能的效果。实现功能性多肽的粒子大小合适；抗氧化活性提高；提高生物利用度的目的。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种利用大豆肽聚集体与EGCG结合制备纳米颗粒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将大豆磨粉过60目筛，与正己烷混合(1：3)进行三次脱脂得到脱脂豆粉。将脱脂豆粉溶于去离子水中(1：10，w/w)，并用2mol/L NaOH调节pH至8.0。所得浆液在45℃条件下连续搅拌2h，并在10000g离心30min后收集上清液。用2mol/L HCl调节上清液pH至4.5沉淀蛋白质，然后在6500g 下离心20min收集沉淀。将得到的沉淀水洗三次，并用2mol/L NaOH调节pH至中性后冷冻干燥得到大豆分离蛋白粉末。

(2)将冻干大豆分离蛋白(SPI)粉末溶于去离子水中(4％，w/v)，于50℃下加热搅拌20min以达到碱性蛋白酶的最适温度。在SPI溶液中加入碱性蛋白酶(1％,v/w)持续酶解20min-3h，并在酶解过程中用2M NaOH始终保持SPI溶液的pH为8.5。将酶解后的混合物调节pH至中性，进行离心，将含有大部分大豆肽聚集体酶解物(SPHs)的上清液分离，取沉淀冻干得到肽聚集体(SPA)；