[发明专利]一种基于减毒流感病毒载体的新型冠状病毒肺炎疫苗

说明书

本发明公开了一种基于减毒流感病毒载体的新型冠状病毒肺炎疫苗。具体地，本发明公开了一种减毒流感病毒株，所述病毒株的基因组中包含嵌合在所述减毒流感病毒株的NA基因的5’端的外源性抗原基因序列，与NA基因和两端的包装信号序列共同组成一抗原表达盒；并且所述病毒株的基因组中含有截短的流感病毒NS1蛋白基因序列。所述减毒流感病毒株可用于制备疫苗，所述疫苗可通过喷鼻免疫方式接种，诱导机体产生针对SARS‑CoV‑2和流感病毒的保护性免疫(包括体液免疫和粘膜免疫)，对新型冠状病毒肺炎和流感具有双重免疫作用。

技术领域

本发明涉及基因工程技术和生物药物领域,具体地,涉及一种可表达SARS-CoV-2RBD蛋白的减毒流感病毒载体疫苗，该疫苗可通过滴鼻方式进行接种，能同时诱导针对SARS-CoV-2 和流感病毒的保护性免疫。

背景技术

新型冠状病毒肺炎（coronavirus disease 2019，COVID-19）是由重症急性呼吸综合征冠状病毒2（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）感染引起的一种急性呼吸道传染病。截止目前，全球已有超过200种COVID-19候选疫苗处于研发当中，其中近50个候选疫苗进入人体临床试验评价。

SARS-CoV-2是目前已知的第7种可感染人的冠状病毒，SARS-CoV-2和SARS-CoV同属冠状病毒科的β属冠状病毒，是有包膜的单股正链RNA病毒，病毒颗粒呈圆形或椭圆形，直径60-140 nm。SARS-CoV-2病毒基因组全长29903 bp，至少编码27种蛋白，包括15种非结构蛋白、4种结构蛋白和8种辅助蛋白。4种结构蛋白分别为刺突蛋白（spike protein，S）、基质蛋白（matrix protein，M）、包膜蛋白（envelop protein，E）和核衣壳蛋白（nucelocapsidprotein，N），其中S、E和M是病毒包膜表面的3种糖蛋白。S以同源三聚体形式存在，其单体可被蛋白酶识别并切割成S1和S2亚基，S1主要包含一个受体结合域（receptor bindingdomain，RBD），RBD识别细胞表面受体，并与其结合，S2亚基介导病毒包膜和细胞膜融合。研究表明，SARS-CoV-2以人类血管紧张素转化酶2（sngiotensin-converting enzyme 2，ACE2）作为受体进入细胞。阻断S或其RBD与ACE2的结合有助于阻断病毒侵入细胞，因此S蛋白或其RBD也是诱导SARS-CoV-2保护性抗体的主要抗原。

流感减毒活疫苗可用于预防流感病毒的感染，其中，重组NS截短的流感病毒减毒活疫苗被广泛研究，研究表明NS截短的三价流感减毒活疫苗免疫后能诱导产生高水平的中和抗体（Pui Wang, Min Zheng, Siu-Ying Lau, Pin Chen, et al. Generation ofDelNS1 Influenza Viruses: a Strategy for Optimizing Live Attenuated InfluenzaVaccines[J]. mBio. 2019 Sep 17;10(5):e02180-19），基于NS截短的流感疫苗目前处于临床试验阶段。

因此，本领域亟待开发一种能够同时针对SARS-CoV-2 和流感病毒的预防性疫苗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够同时针对SARS-CoV-2 和流感病毒的基于减毒流感病毒载体的新型冠状病毒肺炎疫苗。

本发明的第一方面，提供了一种减毒流感病毒株，所述病毒株的基因组中包含外源性抗原基因序列，其中，所述外源性抗原基因序列嵌合在所述减毒流感病毒株的NA基因的5’端，与NA基因和其两端的包装信号序列（packaging sequence）共同组成一抗原表达盒；

并且所述病毒株的基因组中含有截短的流感病毒NS1蛋白基因序列，所述截短的流感病毒NS1蛋白为流感病毒NS1蛋白C末端102个氨基酸缺失的蛋白。