[发明专利]一种检测肺炎支原体的LAMP引物组、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种检测肺炎支原体的LAMP引物组、试剂盒及方法，本发明通过将肺炎支原体的RNA作为检测靶标与LAMP技术联用，克服了现有技术中采用DNA与LAMP技术联用准确性不高、容易产生的假阳性的缺陷，提高了检测的准确性和灵敏度，灵敏度可达10copies/μL，且RNA易降解，污染更加易控。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测肺炎支原体的LAMP引物组、试剂盒及方法。

背景技术

肺炎支原体(Mycoplasma pneumonia，Mp)是一种常见的病原微生物。Mp感染广泛存在于世界各地，平时散在性发病，每隔3-7年出现一次地区流行，每次流行持续1-2年。肺炎支原体感染容易引起多种脏器感染和不典型症状，因此需要准确的检测方法。目前，市面上检测MP的方法有培养法、免疫法等，但培养法培养时间较长，对操作者技术要求较高，敏感性较差，培养阳性率低；免疫法虽然检测速度快，但灵敏度低。

环介导等温扩增技术(1oop-mediated isothermal amplification，LAMP)是一种简单、快速、特异性强、耗费低的核酸扩增技术，可以在等温条件下一步完成，该方法于2000年由Notomi等建立，现已被广泛应用于病原微生物、胚胎性别鉴定、转基因相关检测等方面。

目前，环介导等温扩增技术已经被用于肺炎支原体的检测中，但是检测靶标为DNA，DNA检测法虽然敏感性和特异性高，但在菌体死亡后DNA降解需要一定时间，DNA检测阳性可能是近期MP感染后残留的DNA的假阳性结果。因此，现有技术中存在准确性不高，容易出现假阳性的技术问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测肺炎支原体的LAMP引物组、试剂盒及方法，本方案采用RNA作为检测靶标与LAMP技术联用，提高了检测的准确性和灵敏度，且RNA易降解，污染易控。

为实现本发明的目的，本发明提供了一种用于检测肺炎支原体的LAMP引物组，所述引物组用于引导肺炎支原体的RNA扩增，所述引物组的核苷酸序列如下所示：

肺炎支原体外引物：

MP-F3：5'-GACCTGCAAGGGTTCGTTAT-3'，

MP-B3：5'-ACCTTCATCGTTCACGCG-3'；

肺炎支原体内引物：

MP-FIP：5'-CACGTCATTGCCTTGGTAGGCCTTGATGAGGGTGCGCCATA-3'，

MP-BIP:5'-ATGGGACTGAGACACGGCCCGCTCCATCAAGCTTTCGCT-3'；

肺炎支原体环引物：

MP-LF:5'-ACCCCACCAACTAGCTGA-3'，

MP-LB:5'-CAGCAGTAGGGAATTTTTCACA-3'

进一步地，所述引物组中，MP-F3、MP-B3、MP-FIP、MP-BIP、MP-LF、MP-BF、MP-F4、MP-B4的摩尔比为2:2:16:16:4:4。

本发明的还提供了一种用于检测肺炎支原体的LAMP试剂盒，所述试剂盒包含上述的LAMP引物组。

进一步地，所述试剂盒还包含缓冲液和显色剂，或者缓冲液和显色剂的预混液。

本发明还提供了一种肺炎支原体的检测方法，其包括以下步骤:

S1、获得上述的引物组和待测样本的RNA；

S2、配制LAMP反应体系，利用上述的引物组引导所述RNA进行环介导等温扩增反应，观察反应体系的颜色变化；