[发明专利]一种四环吡咯生物碱类化合物及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种四环吡咯生物碱类化合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)发酵生产

将保藏号为CCTCC NO：M2014086的焦曲霉Aspergillus ustus在固体PDA培养基的平板上划线，于28℃培养箱中培养活化7天后，挑取单菌落接种于PDB培养基中，于温度28℃、180rpm/min的转速下置于摇床上培养，培养2天后收集种子液，然后将种子液按体积比10％的接种量接种到大米培养基中，于温度28℃培养30天，获得发酵物；

(2)浸膏提取

在步骤(1)得到的发酵物中加入等体积比的乙酸乙酯，反复浸泡3次后，对乙酸乙酯浸提液减压蒸干后，加入由乙酸乙酯和水等体积混合得到的溶液重复萃取3次，合并三次萃取所得乙酸乙酯相，最后将乙酸乙酯萃取液减压浓缩蒸干后，获得粗浸膏；

(3)化合物的分离制备

将步骤(2)得到的粗浸膏用体积比为1：1的二氯甲烷和甲醇混合溶剂溶解后，加200-300目硅胶拌样进行VLC减压柱层析，采用体积比为10:1的石油醚/乙酸乙酯溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；将收集得到洗脱组分进行LH-20凝胶柱层析，采用体积比为1：1的二氯甲烷/甲醇为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，按序合并相似流分，共得到6个组分；将收集的第3个组分进行反向中压柱层析，采用洗脱比例为30-100％的甲醇/水溶液梯度洗脱150分钟，流速为20ml/min，收集出峰时间为30-40分钟的流分；将收集的流分蒸干后进行半制备反相高效液相色谱分离，采用体积比为33:68的乙腈/水溶液为流动相，分离纯化得到四环吡咯生物碱类化合物，其结构如(I)所示：

2.根据权利要求1所述的一种四环吡咯生物碱类化合物的制备方法，其特征在于步骤(1)中所述的大米培养基的配制方法如下：将80g大米和4.2g海盐溶于120mL海水中配制而成。

3.根据权利要求1所述的一种四环吡咯生物碱类化合物的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述的半制备反相高效液相色谱的化合物分离制备的流速为2.0mL/min。