[发明专利]一种检测解脲支原体的引物、探针、试剂盒及其使用方法、应用有效
| 申请号： | 202110373186.5 | 申请日： | 2021-04-07 |
| 公开（公告）号： | CN113025735B | 公开（公告）日： | 2022-07-19 |
| 发明（设计）人： | 李腾;吴永辉 | 申请（专利权）人： | 深圳易致生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 深圳市洪荒之力专利代理有限公司 44541 | 代理人： | 王春颖 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市福田区沙头*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 支原体 引物 探针 试剂盒 及其 使用方法 应用 | ||
1.一种检测解脲支原体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括引物以及探针；
所述引物由正向引物以及反向引物组成；
所述正向引物的序列为SEQ ID NO:1，所述反向引物的序列为SEQ ID NO:2；
所述探针的序列为SEQ ID NO:3，所述探针上分别标记有四氢呋喃、荧光报告基团、荧光淬灭基团以及间臂基团；
所述探针中部位置标记有四氢呋喃，所述四氢呋喃的上游和下游分别标记有荧光报告基团和荧光淬灭基团，所述探针的3’端末端标记有间臂基团；所述四氢呋喃标记在距离探针5’末端的33 nt的位置；所述荧光报告基团和荧光淬灭基团的间距为1 nt；所述荧光报告基团为FAM-dT或者HEX-dT，所述荧光淬灭基团为BHQ1-dT或者BHQ2-dT，所述间臂基团为C3Spacer；
所述试剂盒还包括：启动液以及反应液；
所述启动液包括：浓度为100~300 mM的MgCl2；
所述反应液包括：浓度为10~100 mM的Tris-HCl缓冲液、浓度为10~200 mM的KCl、浓度为100~1000 μM的dNTPs、浓度为1~1000 U的Bsu聚合酶、浓度为50~2000 ng/μl的E.coliRecA重组酶以及浓度为0.01~50 U的Exonuclease IV 2U核酸外切酶。
2.根据权利要求1所述的检测解脲支原体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：阳性对照品以及阴性对照品；
所述阳性对照品为含有解脲支原体核酸序列的pUC-57质粒，所述解脲支原体核酸序列如SEQ ID NO:4所示。
3.根据权利要求1所述的检测解脲支原体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：内标品；
所述内标品为含有如SEQ ID NO:8所示的核酸序列的pUC-19质粒，所述内标品对应的检测探针的序列为SEQ ID NO:7。
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