[发明专利]一种SLC25A13基因突变位点检测试剂盒及方法

说明书

本发明公开一种SLC25A13基因突变位点检测试剂盒及方法。所述试剂盒主要成分为PCR扩增引物SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:28和质谱延伸引物SEQ ID NO:29～SEQ ID NO:43。通过使用本发明试剂盒，能够一次性同时准确检测出SLC25A13基因15个突变位点，具有高效、高通量、低成本、自动化的优点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种检测SLC25A13基因位点突变试剂盒及检测方法，是一种基于MassARRAY质谱平台的SLC25A13基因突变型检测方法。

背景技术

希特林蛋白缺乏症(Citrin deficiency)是由SLC25A13基因突变引起的Citrin转运体功能障碍的一种常染色体隐性遗传疾病。本病发病时期从新生儿到成人年龄不一，根据发病年龄不同，临床表现不同，早期发病多表现为肝内胆汁淤积(NICCD)，脂肪肝，成人期发病(CTLN2)多为高氨血症、脂肪肝或合并胰腺炎、肝细胞癌等，同时不同发病期都伴有不同程度的高氨血症和高瓜氨酸血症，临床上容易与其他肝病、胆汁淤积性肝炎、氨基酸代谢疾病等混乱。

目前，我国采用串联质谱技术(MS-MS)测定新生儿末梢血中瓜氨酸浓度来对该病进行早期筛查。但据研究报道，仅40-50％的NICCD患者通过新生儿串联质谱筛查最终确诊，大多数患者出现黄疸、发育迟缓等症状后才就医确诊，原因可能为部分患者瓜氨酸迟发升高，新生儿串联筛查结果阴性，导致该疾病漏筛率较高。有研究采用分子检测技术对SLC25A13基因3个热点突变进行该疾病新生儿筛查，检出率虽有所提高但仍远低于发病率。在临床实践中随着NICCD患者数的不断增加，该病日益得到临床医生的重视。因此，急需提高NICCD新生儿筛查的敏感性。

国内外正式报道的SLC25A13突变类型超过60余种，我国人群突变频率最高主要为c.851_854del4bp、IVS16ins3kb、c.1638_1660dup、IVS6+5GA、c.1399CT，总体大约占NICCD患者的85％以上。该基因突变在我国患者中高度的集中性，突变热点明确，有利于进行早期新生儿基因筛查。

发明内容

本发明的目的在于提供一种SLC25A13基因突变位点检测试剂盒，是一种基于MassARRAY质谱平台的SLC25A13基因突变检测试剂盒。

本发明提供的试剂盒，由PCR扩增引物和质谱延伸引物，10×PCR反应缓冲液、dNTPMix(25mM)、MgCl₂(25mM)、PCR反应Taq酶、SAP反应缓冲液、SAP酶、iPlex反应缓冲液、iPlexTermination Mix、Extension反应Taq酶、MassARRAY芯片组成。其中：PCR扩增引物序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:28所示，质谱延伸引物序列如SEQ ID NO:29～SEQ ID NO:43中所示。

所述的PCR扩增引物为包含序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:28所示的1管扩增引物的混合物，所述的PCR延伸引物为包含序列如SEQ ID NO:29～SEQ ID NO:43中所示的1管延伸引物的混合物。

本发明的另一目的在于克服现有技术的不足，提供一种检测SLC25A13基因突变试剂盒的使用方法，通过以下步骤实现：

(1)设计如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:28所示的扩增引物和如SEQ ID NO:29～SEQID NO:43所示的延伸引物；

(a)PCR扩增引物：

PCR扩增引物为根据SLC25A13基因设计的特异性针对15个热点突变位点的扩增引物，所述扩增引物可扩增包括突变位点在内的一段DNA序列。