[发明专利]一种用于动物组织直接PCR扩增的方法

说明书

本发明公开了一种用于动物组织直接PCR扩增的方法，涉及生物医学技术领域，方法包括如下步骤：先使用取样器取动物组织加入PCR管中，再在PCR管中加入酶预混液、上游引物和下游引物并充分混匀，然后将PCR管放入PCR仪中进行扩增；取样器包括手柄和取样头，取样头可拆卸地安装在所述手柄上；酶预混液包括Tris‑HCl缓冲液、DNA聚合酶、dNTPs、镁离子、单价阳离子、PCR增效剂、裂解剂、纯化水。本发明的方法使用含有特定原料组成的酶预混液就能实现动物组织直接PCR扩增，无需额外的组织裂解处理，该方法不仅快捷方便、节约成本，还可以避免核酸提取中各种有机溶剂的使用，更健康、更环保。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种用于动物组织直接PCR扩增的方法。

背景技术

目前的动物组织直接PCR扩增方法虽然声称无需核酸提取步骤，但都需要配合具有组织裂解液功能的溶液等先对动物组织样本进行加热裂解处理之后将裂解液的上清(含粗制的DNA)作为模板进行PCR扩增，并不是真正的在反应体系中加入动物组织进行直接PCR扩增。这样的PCR扩增方法工序复杂，不便捷，也会增加扩增成本。另外，现有的PCR扩增方法中取样过程中经常出现组织加量大小不一致的情况，从而导致取样差异，进而会造成扩增实验的失败。

发明内容

为此，本发明提供一种用于动物组织直接PCR扩增的方法，以解决现有PCR扩增方法存在工序复杂、不便捷、扩增成本高、取样存在差异等问题。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

根据本发明的第一方面，一种用于动物组织直接PCR扩增的方法，所述方法包括如下步骤：

先使用取样器取动物组织加入PCR管中，再在PCR管中加入酶预混液、上游引物和下游引物并充分混匀，然后将装有动物组织、酶预混液、上游引物和下游引物的PCR管放入PCR仪中进行扩增；

所述取样器包括手柄和取样头，所述取样头可拆卸地安装在所述手柄上；

所述酶预混液包括Tris-HCl缓冲液、DNA聚合酶、dNTPs、镁离子、单价阳离子、PCR增效剂、裂解剂、纯化水。

通过上述技术方案，本发明一种用于动物组织直接PCR扩增的方法中采用特定原料组成的酶预混液能实现动物组织直接PCR扩增，无需额外的组织裂解处理，减少了扩增工序，降低了扩增成本，使扩增更加便捷。其中，酶预混液含有除模板和引物外的其他PCR扩增必需组分，同时在不影响DNA聚合酶活性和PCR扩增的条件下，向其中添加具有动物组织裂解力的裂解剂及可以保护酶并抗抑制的PCR增效剂，能有效实现动物组织直接PCR扩增。本发明的方法中采用专门的微量动物组织取样器对动物组织进行取样，保证取样标准化，能有效地避免取样差异造成的扩增失败等问题。

进一步地，所述Tris-HCl缓冲液的体积浓度为20mmol/L；所述Tris-HCl缓冲液的pH值为8.3～9.2；所述DNA聚合酶为HotStart Taq酶和pfu酶中的一种或两种；所述DNA聚合酶的质量浓度为0.5％～4％。

进一步地，所述dNTPs是dATP、dCTP、dGTP、dTTP按1：1：1：1比例混合；所述dNTPs的体积浓度为200～350μmol/L；所述镁离子为氯化镁或硫酸镁的一种或两种；所述镁离子的体积浓度为1.5～4mmol/L。

进一步地，所述单价阳离子为氯化钾或硫酸铵中的一种或两种；所述单价阳离子的终体积浓度为10～50mmol/L；所述PCR增效剂为去离子甲酰胺、DMSO、BSA、甜菜碱、海藻糖、甘油、单链结合蛋白、氯化四甲基铵中的一种或几种；所述PCR增效剂的质量浓度为0.05％～15％。

进一步地，所述裂解剂为吐温20、吐温80、曲拉通X-100、乙基苯基聚乙二醇、聚乙二醇十六烷基醚、十二烷基硫酸钠、月桂酰肌氨酸钠、十二烷基硫酸锂中的一种或几种；所述裂解剂的质量浓度为0.01％～5％。