[发明专利]一种用于动物组织直接PCR扩增的方法

权利要求书

1.一种用于动物组织直接PCR扩增的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

先使用取样器取动物组织加入PCR管中，再在PCR管中加入酶预混液、上游引物和下游引物并充分混匀，然后将装有动物组织、酶预混液、上游引物和下游引物的PCR管放入PCR仪中进行扩增；

所述取样器包括手柄和取样头，所述取样头可拆卸地安装在所述手柄上；

所述酶预混液包括Tris-HCl缓冲液、DNA聚合酶、dNTPs、镁离子、单价阳离子、PCR增效剂、裂解剂、纯化水。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Tris-HCl缓冲液的体积浓度为20mmol/L；所述Tris-HCl缓冲液的pH值为8.3～9.2；所述DNA聚合酶为HotStart Taq酶和pfu酶中的一种或两种；所述DNA聚合酶的质量浓度为0.5％～4％。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述dNTPs是dATP、dCTP、dGTP、dTTP按1：1：1：1比例混合；所述dNTPs的体积浓度为200～350μmol/L；所述镁离子为氯化镁或硫酸镁的一种或两种；所述镁离子的体积浓度为1.5～4mmol/L。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述单价阳离子为氯化钾或硫酸铵中的一种或两种；所述单价阳离子的终体积浓度为10～50mmol/L；所述PCR增效剂为去离子甲酰胺、DMSO、BSA、甜菜碱、海藻糖、甘油、单链结合蛋白、氯化四甲基铵中的一种或几种；所述PCR增效剂的质量浓度为0.05％～15％。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述裂解剂为吐温20、吐温80、曲拉通X-100、乙基苯基聚乙二醇、聚乙二醇十六烷基醚、十二烷基硫酸钠、月桂酰肌氨酸钠、十二烷基硫酸锂中的一种或几种；所述裂解剂的质量浓度为0.01％～5％。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶预混液、所述上游引物和所述下游引物的体积比为23：1：1；所述上游引物和所述下游引物的浓度均为10μmol/L。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述扩增的程序为：预变性95℃10min，变性95℃30s，退火55℃30s，延伸1kb/min，循环数40，后延伸5min。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，使用所述取样器提取的动物组织的直径为1mm，厚度为1-2mm。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述手柄呈“T”型状；所述取样头包括连接部和铲头，所述连接部的一端与所述手柄可拆卸地连接，另一端连接所述铲头。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述铲头包括半圆形铲刀和弧形包裹板，所述半圆形铲刀的一端与所述连接部连接，另一端两侧分别连接有所述弧形包裹板；所述半圆形铲刀的直径为1mm。