[发明专利]一种检测猪圆环病毒2e型的试剂及其应用

权利要求书

1.一种检测猪圆环病毒2e型的试剂，其特征在于，所述试剂包括序列如SEQ ID No.1所示的正向引物PCV2e-117-F、序列如SEQ ID No.2所示的反向引物PCV2e-117-R和序列如SEQID No.3所示荧光探针PCV2e-117-probe。

2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，荧光探针独立地于5’端结合荧光基团，3’端结合淬灭基团。

3.根据权利要求2所述的试剂，其特征在于，所述荧光探针的5’端标记的荧光报告基团选自FAM、JOE或ROX、TET、TAMRA、HEX、VIC、CY3、CY5或Texas Red；所述荧光探针的3’端标记的荧光淬灭基团选自BHQ、TAMRA、Eclipse、Dabcyl、Lowa Black^TM RQ或Lowa Black^TM FQ。

4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，所述荧光探针的5’端标记的荧光报告基团为FAM。

5.根据权利要求1~4任一项所述的试剂在制备猪圆环病毒2e型检测的试剂盒中的应用。

6.一种用于猪圆环病毒2e型检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1~4任一项所述的试剂。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括FastFire qPCRPreMix和ddH₂O。

8.一种猪圆环病毒2e型的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、提取样品病毒总核酸，逆转录成CDNA；

S2、使用权利要求1~4任一项所述的试剂配制荧光定量PCR反应体系，根据反应结果是否有S曲线的生成判定是否为猪圆环病毒2e型，所述方法不以疾病的诊断和治疗为目的。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，步骤S2中使用权利要求4所述的试剂配制荧光定量PCR反应体系，根据反应结果是否有S曲线的生成判定是否为猪圆环病毒2e型。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，步骤S2中所述荧光定量PCR反应体系为：引物PCV2e-117-F 1.0μl，引物PCV2e-117-R 1.0μl，荧光探针PCV2e-117-probe 1.0μl，2×FastFire qPCR PreMix 12.5μl，ddH₂O 7.5μl，模板DNA 2.0μl，总体积为25µl。

11.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，步骤S2中所述荧光定量PCR的扩增条件为：95℃预变性2min；95℃变性5s，58℃退火延伸15s，采集FAM通道荧光信号，共计45个循环。