[发明专利]一种重组天冬氨酸裂解酶及高重复利用率用于制备R-3-氨基丁酸的方法有效
| 申请号： | 202110340692.4 | 申请日： | 2021-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN112921023B | 公开（公告）日： | 2022-11-11 |
| 发明（设计）人： | 杨卫华;张利坤;谈聪;唐云平;李业;彭汶铎;钱敏帆;严燕兵;倪建洲;吴怀春 | 申请（专利权）人： | 长兴制药股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N15/60;C12N11/091;C12N11/089;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州裕阳联合专利代理有限公司 33289 | 代理人： | 顾晨 |
| 地址： | 313100 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 天冬氨酸 裂解 重复 利用率 用于 制备 氨基 丁酸 方法 | ||
1.一种重组天冬氨酸裂解酶，其特征在于：该裂解酶具有由第一序列、SEQ ID NO.1和第二序列依次串联形成的氨基酸序列，其中，所述第一序列和第二序列的长度分别为SEQID NO.1的2-5%，任意氨基酸选自C半胱氨酸、G甘氨酸、H组氨酸、K赖氨酸、N天冬氨酸、Q谷氨酰胺、R精氨酸、S丝氨酸、T苏氨酸、Y酪氨酸中的任意一个；其中，所述第一序列为SEQ IDNO.2，第二序列为SEQ ID NO.3。
2.一种重组表达载体，其包含权利要求1所述的基因片段。
3.利用如权利要求2所述的重组表达载体制备获得的宿主细胞。
4.分离的基因片段，包括如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列，其表达SEQ ID NO.2、SEQID NO.1、SEQ ID NO.3依次串联形成的氨基酸序列。
5.一种高重复利用率制备R-3-氨基丁酸的方法，其特征在于：
（1）将表达权利要求1所述重组天冬氨酸裂解酶的菌种破壁制备粗酶液，离心获得酶清液，按每1000U酶清液与1~10g载体混合，获得固定化酶；
（2）以浓度为100~400g/L的巴豆酸、铵盐为底物，加入所述固定化酶，在pH为8.5-9.5的条件下进行生物酶催化，具有不低于98%的转化率；
（3）回收固定化酶，重复用于步骤（2）所述的生物酶催化反应。
6.根据权利要求5所述的一种高重复利用率制备R-3-氨基丁酸的方法，其特征在于：所述载体为环氧树脂和/或氨基树脂。
7.根据权利要求5所述的一种高重复利用率制备R-3-氨基丁酸的方法，其特征在于：所述固定化酶与载体固定后可重复利用20次，仍保留不低于50%的相对酶活。
8.根据权利要求7所述的一种高重复利用率制备R-3-氨基丁酸的方法，其特征在于：所述固定化酶与氨基树脂固定后可重复利用20次，仍保留不低于65%的相对酶活，或所述固定化酶的酶活回收率不低于40%。
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