[发明专利]一种树木细根的石蜡切片制作方法

说明书

本发明公开一种树木细根的石蜡切片制作方法，涉及植物解剖技术领域，包括步骤：步骤一，取材与固定：取树木细根材料，处理后固定并抽气；步骤二，保存与软化：将低级幼嫩细根保存；将高级坚硬细根软化；步骤三，脱水：将低级幼嫩细根置于乙醇中脱水；将高级坚硬细根置于蒸馏水、乙醇中脱水；步骤四，透明：材料置于混合溶液、二甲苯、二甲苯中透明；步骤五，浸蜡：材料置于混合液中浸泡并浸蜡；步骤六，包埋：用液蜡包埋；步骤七，切片、粘片、展片与烤片：将材料切出蜡带，粘于载玻片上，将蜡带舒展，烘烤；步骤八，脱蜡和复水：将切片置于二甲苯、二甲苯、混合溶液中脱蜡，置于乙醇和蒸馏水中复水；步骤九，染色和封片：对切片染色，封片干燥。

技术领域

本发明涉及植物解剖技术领域，特别涉及一种树木细根的石蜡切片制作方法。

背景技术

石蜡切片是观察植物器官、组织和细胞最常用的一种方法，是植物解剖学研究当中最为经典的实验技术之一。

细根通常是指直径≤2mm的根，是植物获取土壤水分和养分的重要器官，具有复杂的分支系统，近年来针对细根的研究主要基于根序分级，即最先端具有根尖的根定义为1级根，两条1级根交汇形成的母根为2级根，2级根的母根为3级根，依此类推，通常会区分到5级根。细根对植物功能和生态系统过程发挥着关键作用，厘清其功能性状(形态、解剖、化学和生理性状)之间的关系及其机理对于深入理解植物功能性状和气候变化下生态系统结构与功能关系具有重要意义。树木细根石蜡切片技术是研究树木细根解剖学性状的重要手段，但由于树木从低级细根到高级细根的木质部逐步发育完善，在组织结构上具有较大差异，具体表现为低级细根(通常为1～3级根)薄壁组织发达，极为幼嫩，而高级细根(通常为4～5级根)木质部和韧皮部发达，材质坚硬且木质部、韧皮部和形成层硬度不一致，因此常规的石蜡切片技术极易导致低级幼嫩细根组织皱缩和高级坚硬细根组织褶皱或破碎，不良的切片效果严重影响对树木细根解剖性状的观察，限制了树木细根功能性状的研究。

因此，针对极为幼嫩的低级细根和坚硬且硬度不一致的高级细根，若是能够根据材料的特性对石蜡切片方法进行改进和完善，能为树木细根的显微解剖学研究提供技术支撑，对揭示树木细根功能性状之间关系及其机理的研究具有重要意义。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供一种操作简单且通用、能够保证得到的切片组织结构清晰完整，便于观察的树木细根的石蜡切片制作方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种树木细根的石蜡切片制作方法，包括如下步骤：

步骤一，取材与固定：利用工具在室外取得树木细根材料，处理过后置于固定液中固定并抽气，得到固定后的树木细根材料，所述树木细根材料包括低级幼嫩细根和高级坚硬细根；

步骤二，保存与软化：将固定后的低级幼嫩细根置于70％乙醇中保存，将高级坚硬细根置于20％乙二胺中软化，得到软化后的高级坚硬细根；

步骤三，脱水：将固定后的低级幼嫩细根依次置于70％乙醇、85％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、无水乙醇中进行脱水，得到脱水后的低级幼嫩细根，将软化后的高级坚硬细根依次置于蒸馏水、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇、85％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、无水乙醇中进行脱水，得到脱水后的高级坚硬细根；

步骤四，透明：将脱水后的材料依次置于体积比为1:1的无水乙醇和二甲苯混合溶液、二甲苯、二甲苯中进行透明，得到透明后的材料；

步骤五，浸蜡：将透明后的材料置于体积比为1:1的二甲苯和液蜡混合液中浸泡，然后将透明后的材料多次置于纯液蜡中浸蜡，得到浸蜡后的材料；

步骤六，包埋：将浸蜡后的材料用同一批液蜡包埋，得到包埋后的材料；

步骤七，切片、粘片、展片与烤片：将包埋后的材料用切片机切出蜡带，粘于均匀涂抹粘片剂的载玻片上，用蒸馏水将蜡带舒展，然后置于烤片机上烤得到干燥后的切片；