[发明专利]一种树木细根的石蜡切片制作方法

权利要求书

1.一种树木细根的石蜡切片制作方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤一，取材与固定：利用工具在室外取得树木细根材料，处理过后置于固定液中固定并抽气，得到固定后的树木细根材料；

步骤二，保存与软化：将固定后的低级幼嫩细根置于70％乙醇中保存；将高级坚硬细根置于20％乙二胺中软化，得到软化后的高级坚硬细根；

步骤三，脱水：将固定后的低级幼嫩细根依次置于70％乙醇、85％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、无水乙醇中进行脱水，得到脱水后的低级幼嫩细根，将软化后的高级坚硬细根依次置于蒸馏水、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇、85％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、无水乙醇中进行脱水，得到脱水后的高级坚硬细根；

步骤四，透明：将脱水后的材料依次置于体积比为1:1的无水乙醇和二甲苯混合溶液、二甲苯、二甲苯中进行透明，得到透明后的材料；

步骤五，浸蜡：将透明后的材料置于体积比为1:1的二甲苯和液蜡混合液中浸泡，然后将透明后的材料多次置于纯液蜡中浸蜡，得到浸蜡后的材料；

步骤六，包埋：将浸蜡后的材料用同一批液蜡包埋，得到包埋后的材料；

步骤七，切片、粘片、展片与烤片：将包埋后的材料用切片机切出蜡带，粘于均匀涂抹粘片剂的载玻片上，用蒸馏水将蜡带舒展，然后置于烤片机上烤得到干燥后的切片；

步骤八，脱蜡和复水：将干燥后的切片依次置于二甲苯、二甲苯、体积比为1:1的无水乙醇和二甲苯混合溶液中脱蜡，然后依次置于无水乙醇、无水乙醇、95％乙醇、85％乙醇、70％乙醇、50％乙醇、30％乙醇和蒸馏水中复水；

步骤九，染色和封片：采用番红-固绿染色法对切片进行染色，然后进行封片自然干燥；

所述步骤一中将低级幼嫩细根置入新配的50％FAA固定液中抽气10～15min，然后固定24h；所述50％FAA固定液中50％乙醇、冰醋酸和37％甲醛的体积比为90:5:5；

所述步骤一中将坚硬的高级细根置入新配的70％FAA固定液中抽气20～25min，然后固定24h，所述70％FAA固定液中70％乙醇、冰醋酸、37％甲醛的体积比为90:5:5。

2.如权利要求1所述的树木细根的石蜡切片制作方法，其特征在于：步骤二中，将高级坚硬细根从固定液中取出用70％乙醇洗涤3min，然后置于70％乙醇中浸泡12h，再依次转入50％乙醇、30％乙醇、蒸馏水中各浸泡2h，接着将高级坚硬细根置于20％乙二胺中，抽气至不再产生气泡，约10min，最后将高级坚硬细根浸泡在乙二胺中软化4～6d。

3.如权利要求1所述的树木细根的石蜡切片制作方法，其特征在于：所述步骤三中材料的脱水时间为1-2h。

4.如权利要求1所述的树木细根的石蜡切片制作方法，其特征在于：所述步骤四中材料的透明时间为30min-1.5h。

5.如权利要求1所述的树木细根的石蜡切片制作方法，其特征在于：所述步骤五中透明后的材料置于体积比为1:1的二甲苯和液蜡混合液中浸泡时间为12h，温度为40℃；然后将材料置于纯液蜡中浸蜡，液蜡更换次数为3次，每次浸蜡时间为4h，温度为65℃。

6.如权利要求1所述的树木细根的石蜡切片制作方法，其特征在于：所述步骤八中，将干燥后的切片放入二甲苯中浸泡的时间为40min，然后更换新的二甲苯，浸泡时间为20min，再放入到体积比为1:1的无水乙醇和二甲苯混合溶液中浸泡30min，且始终控制在30℃的恒温条件中。

7.如权利要求1所述的树木细根的石蜡切片制作方法，其特征在于：所述步骤八中复水的时间范围为10min-30min。

8.如权利要求1所述的树木细根的石蜡切片制作方法，其特征在于：所述步骤九中，将切片置于1％番红溶液中浸泡12h，然后用蒸馏水将切片洗涤3次洗去浮色，随后依次置于30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇、85％乙醇、95％乙醇中各浸泡1min，再用0.5％固绿浸泡染色30s，接着将切片依次置于95％乙醇、无水乙醇、无水乙醇中各浸泡1min以洗去浮色，再将切片依次置于体积比为1:1的无水乙醇和二甲苯混合溶液、二甲苯、二甲苯中各浸泡20s，随后立即滴加中性树胶，盖上盖玻片进行封片，最后自然晾干。