[发明专利]叶酸靶向关节炎部位pH敏感多功能纳米载体的制备方法

权利要求书

1.一种叶酸靶向关节炎部位的pH敏感多功能纳米载体制备方法，其特征在于：以叶酸连接的生物可降解高分子及酸敏感材料聚缩酮为辅料，通过乳化溶剂挥发法制备的可以靶向关节炎部位纳米载体。

2.如权利要求1所述的一种叶酸靶向关节炎部位的pH敏感多功能纳米载体制备方法，其特征在于：

所述聚合物高分子包括乳酸羟基乙酸共聚物、聚乳酸；

所述叶酸连接的生物可降解高分子为FA-PLGA；

所述的酸敏感材料聚缩酮，包括聚（环己烷-1，4-丙酮二亚甲基酮）(PCADK)、聚((环己烯86.7%，1,5-戊二醇13.3%)-1,4-二基丙酮二亚甲基酮)（PK3）。

3.如权利要求1所述的一种叶酸靶向关节炎部位的pH敏感多功能纳米载体制备方法，其特征在于具体包括以下步骤：

首先，采用改进的Bligh-Dyer法合成siRNA/DOTAP复合物：

称取2 nmol siRNA，溶于500 μL DEPC水中；称取1.25 mg DOTAP溶于500 μL DCM中；在超声条件下，将DOTAP溶液逐滴加入到siRNA溶液中，加入1.05 mL的甲醇，超声混匀；室温条件下孵育30 min，加入500 μL DCM和500 μL DEPC水，涡旋混匀，5000 rpm离心5 min；吸除上层甲醇-水混合溶液，得到下层siRNA/DOTAP复合物的DCM溶液；

乳化溶剂挥发法制备的叶酸靶向关节炎部位的pH敏感多功能纳米载体：

称取一定量的PK3、FA-PEG-PLGA和PLGA，加入到上述得到的siRNA/DOTAP复合物的DCM溶液，补加相同体积的有机溶剂，作为O相；称取2 g PVA，加入到100 mL DEPC水中，加热溶解，作为W相；将O相在超声条件下缓慢加入到W相中，超声一定时间，得到初乳；将得到的初乳加入到10 mL DEPC水中，室温条件下持续搅拌4 h挥发有机溶剂，18000 rpm离心15 min，DEPC水洗涤收集纳米粒，重复3次，-40℃冷冻干燥，4℃保存。

4.如权利要求3所述制备方法中，超声时间为1~5min。

5.如权利要求3所述制备方法中，油相水相比例为1：1~1：3。

6.如权利要求3制备方法中所述有机溶剂包括但不限于：甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯中一种或其中两种或两种以上的混合溶剂。