[发明专利]柳杉不同组织的荧光定量内参基因及其专用引物和应用

说明书

本发明公开了柳杉不同组织的荧光定量内参基因及其专用引物和应用，属于植物分子生物学技术领域。该荧光定量内参基因为UBI、CYP和SDH1基因，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。本发明通过柳杉转录组数据筛选了12个候选内参基因基因序列，利用三款内参基因稳定性评测软件对候选内参基因的稳定性进行评估，获得了柳杉不同组织的实时荧光定量PCR的最适基因UBI、CYP和SDH1。并设计了内参基因的实时荧光定量PCR引物，该引物特异性强，扩增效率高，能够大大的提高采用实时荧光定量检测柳杉基因时的检测效率，并提高了检测结果的可信度。

技术领域

本发明属于植物分子生物学技术领域，具体涉及柳杉不同组织的荧光定量内参基因及其专用引物和应用。

背景技术

实时荧光定量PCR(qRT-PCR)由于其灵敏度高、重复性强、特异性强、快速和高效的特点，成为研究基因表达的主要方法。但qRT-PCR会受到RNA纯度、数量和反转录效率的影响，因此需要引入内参基因作为标准以准确量化基因表达。

内参基因是指在理想情况下，其在植物不同组织、不同生长阶段和不同条件处理下都能够稳定表达，且不受外界环境影响的基因。目前已有大量报道鉴定出了多种植物的合适内参基因。

柳杉(Cryptomeria fortunei Hooibrenk)，又名长叶孔雀松，杉科柳杉属，是我国重要的工业用材和园林绿化树种。在对柳杉的分子生物学研究过程中，难免会涉及到柳杉基因表达的研究，但关于使用qRT-PCR分析和验证柳杉基因表达水平所使用的内参基因的报道基本没有，而稳定的内参基因是保证qRT-PCR结果准确的关键因素，因此有必要鉴定出适合柳杉不同组织荧光定量的内参基因用于柳杉的基因表达研究。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明所要解决的第一技术问题是提供柳杉不同组织的荧光定量内参基因，能够应用在柳杉不同组织的实时荧光定量中；本发明所要解决的第二技术问题是提供柳杉不同组织的荧光定量内参基因的专用引物；本发明所要解决的第三技术问题是提供上述内参基因或专用引物在柳杉荧光定量中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

柳杉不同组织的荧光定量内参基因，为UBI、CYP和SDH1基因，UBI基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；CYP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；SDH1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

所述的柳杉不同组织的荧光定量内参基因的专用引物，

UBI基因的引物序列如下：

UBI正向引物：5’-CGTTAAAGCCAAGATCCAGGACAA-3’；

UBI反向引物：5’-TCCATCCTCAAGCTGTTTCCC-3’；

CYP基因的引物序列如下：

CYP正向引物：5’-GCCATTTCCACAGGGTTATCAAG-3’；

CYP反向引物：5’-GCCATAGAAAGGAGACCAGGAC-3’；

SDH1基因的引物序列如下：

SDH1正向引物：5’-GCCAATACCTGTCTTGCCAAC-3’；

SDH1反向引物：5’-CTCTCCAGCAGCCATTAGTCC-3’。

所述的柳杉不同组织的荧光定量内参基因在柳杉荧光定量中的应用。

所述的柳杉不同组织的荧光定量内参基因的专用引物在柳杉荧光定量中的应用。

有益效果：相比于现有技术，本发明的优点为：