[发明专利]一种用于人粪便病原微生物基因组建库的试剂盒和测序方法

权利要求书

1.一种用于人粪便中的病原微生物基因组建库的核酸提取试剂盒，其特征在于，包括：核酸释放剂LysisA、增强剂Lysis Enhancer、去抑制剂IRT、结合液Binding Buffer、洗涤液1和洗涤液2；

所述的核酸释放剂Lysis A包括20mM～40mM EDTA、40mM～80mMTri-HCl、2％～5％PVP-40(质量分数)、溶剂为DEPC水，PH值为9-10；

所述的增强剂Lysis Enhancer包括12％～15％SDS(质量分数)、4％～8％PVP-40(质量分数)、溶剂为DEPC水。

2.根据权利要求1所述的核酸试剂盒，其特征在于，所述的核酸释放剂Lysis A包括20mM EDTA、50mM Tri-HCl、2％PVP-40(质量分数)、溶剂为DEPC水，所述的增强剂LysisEnhancer包括15％SDS(质量分数)、5％PVP-40(质量分数)，溶剂为DEPC水。

3.根据权利要求1所述的核酸试剂盒，其特征在于，所述的去抑制剂IRT包括：120mMNH₄Al(SO₄)₂.12H₂O,溶剂为DEPC水,PH值3.0-4.0；

所述的结合液Binding Buffer包括：3M异硫氰酸胍、16.7％异丙醇(V/V)、2％TritonX100(V/V)、10mM EDTA、5mM Tris-HCl,溶剂为DEPC水,PH值6.0-7.0；

所述的洗涤液1包括：20％乙醇(V/V)、20％异丙醇(V/V)、70mM氯化钠、20mMTris-HCl，溶剂为DEPC水，PH值6.0-7.0；

所述的洗涤液2包括：70％乙醇(V/V)、20mM Tris-HCl,溶剂为DEPC水,PH值6.0-7.0。

4.一种用于人粪便中的病原微生物基因组建库的片段化处理与末端修饰部分试剂盒，其特征在于，包括AC Buffer、AC Enzymes；

所述的AC Buffer包括：500mM Tris-HCl、200mM KCl、100mM MgCl2、1mM DTT、10mMATP、10mM dATP、2mM dTTP、2mM dGTP、2mM dCTP、0.1％Triton X-100(v/v),溶剂为DEPC水；

所述的AC Enzymes包括：1.5U/ul T4 Polynucleotide Kinase(Enzymatics，Y9040L)、1U/ul T4 DNAPolymerase(Enzymatics，P7080L)、0.5U/ul Klenow Fragment(Enzymatics，P7060L)、1U/ul Taq-B DNAPolymerase(Enzymatics，P7250L)、4mM Tris-HCl、5mM KCl、0.8mM DTT、0.2mM EDTA、22％(质量分数)Glycerol、0.5％Triton X-100(v/v)，溶剂为DEPC水。

5.一种用于人粪便中的病原微生物基因组建库的接头连接与富集部分的试剂盒，其特征在于，包括Ligation XP、AD Buffer；

所述的Ligation XP包括：14％Glycerol(v/v)、20％PEG-6000(质量分数)、25％1,2-Propanediol(v/v)、40mM Tris-HCl、10mM MgCl2、10mMATP、10mM DTT、80U/ul RapidT4DNALigase(EnzyValley)，溶剂为DEPC水；

所述的AD Buffer包括：10mM Tris-HCl、0.5mM EDTA、50mMNaCl，溶剂为DEPC水。