[发明专利]一种合成帕瑞肽的方法

权利要求书

1.一种帕瑞肽的合成方法，其特征在于，该合成方法包括以下步骤：

(1)以2-CTC Resin为树脂载体，选择Fmoc-Phe-OH为起始氨基酸，通过固相合成法依次连接帕瑞肽序列中相对应的氨基酸，得到2-CTC Resin-Phe-Tyr(Bzl)-Lys(Boc)-D-Trp-Phg-(4-Boc-NH-C₂H₄-NH-CO-O)-Pro-H；

(2)将2-CTC Resin-Phe-Tyr(Bzl)-Lys(Boc)-D-Trp-Phg-(4-Boc-NH-C₂H₄-NH-CO-O)-Pro-H用酸切割解离，得到全保护线性六肽化合物HO-Phe-Tyr(Bzl)-Lys(Boc)-D-Trp-Phg-(4-Boc-NH-C₂H₄-NH-CO-O)-Pro-H；

(3)将化合物HO-Phe-Tyr(Bzl)-Lys(Boc)-D-Trp-Phg-(4-Boc-NH-C₂H₄-NH-CO-O)-Pro-H在液相条件下环合，得到环肽Cyclo-[Phe-Tyr(Bzl)-Lys(Boc)-D-Trp-Phg-(4-Boc-NH-C₂H₄-NH-CO-O)-Pro]；

(4)将环肽Cyclo-[Phe-Tyr(Bzl)-Lys(Boc)-D-Trp-Phg-(4-Boc-NH-C₂H₄-NH-CO-O)-Pro]进行去保护反应，得到帕瑞肽粗品Cyclo-[Phe-Tyr(Bzl)-Lys-D-Trp-Phg-(NH₂-C₂H₄-NH-CO-O)-Pro]；

(5)利用制备液相色谱将帕瑞肽粗品纯化、冻干，得到帕瑞肽纯品。

2.根据权利要求1所述的一种帕瑞肽的合成方法，其特征在于，步骤(1)所述缩合反应的起始氨基酸为Fmoc-Phe-OH，依次缩合氨基酸为：Fmoc-Tyr(Bzl)–OH,Fmoc-Lys(Boc)-OH,Fmoc-D-Trp-OH,Fmoc-Phg-OH,Fmoc-(4-Boc-NH-C₂H₄-NH-CO-O)-Pro-OH。

3.根据权利要求1所述的一种帕瑞肽的合成方法，其特征在于，步骤(1)所述固相合成法反应中以DIC/HOBt为缩合剂和消旋抑制剂，投料比为树脂：DIC:HOBt＝1.0:2.0:2.5，反应中氨基酸投料量为2-3倍所投树脂摩尔数，缩合反应温度为25.0℃左右。

4.根据权利要求1所述的一种帕瑞肽的合成方法，其特征在于，步骤(1)所述缩合反应的脱Fmoc保护试剂为20％哌啶/DMF溶液，反应时间为2h。

5.根据权利要求1所述的一种帕瑞肽的合成方法，其特征在于，步骤(2)所述解离试剂为0.5％-1.0％TFA/DCM溶液，树脂切割两次，每次反应时间为45min。旋干切割液部分后，加无水乙醚沉降，以3000r/min离心3min，离心2次，合并白色固体，得到线性六肽化合物：HO-Phe-Tyr(Bzl)-Lys(Boc)-D-Trp-Phg-(4-Boc-NH-C₂H₄-NH-CO-O)-Pro-H。

6.根据权利要求1所述的一种帕瑞肽的合成方法，其特征在于，步骤(3)所述液相环合的环化液摩尔比为：样品:HATU:DIPEA＝1:2.5:3.5，环化条件为-10℃，反应完毕后加水淬灭，以3000r/min离心3min，离心2次，得到白色固体加水继续离心2次，得到帕瑞肽前体化合物：Cyclo-[Phe-Tyr(Bzl)-Lys(Boc)-D-Trp-Phg-(4-Boc-NH-C₂H₄-NH-CO-O)-Pro]。