[发明专利]检测猪伪狂犬病病毒的RAA引物对和探针组合及试剂盒

权利要求书

1.一种检测猪伪狂犬病病毒的RAA引物对和探针组合，其特征在于：

所述引物对包括用于鉴定猪伪狂犬病病毒gE基因的上游引物PRV-gE-F和下游引物PRV-gE-R，其中，所述上游引物PRV-gE-F和下游引物PRV-gE-R的序列如下：

上游引物PRV-gE-F：

5’-GCTGACCGCCTGCCCCTTCGACGCCTTCGGCGAG-3’；

下游引物PRV-gE-R：

5’-GCCGCGGTGGCGACGAGCGTGTAGTCCCAGGTG-3’；

所述探针PRV-gE-Probe的序列如下：5’-GCACACGAACGCCACCGCGGACGAGTCGGGGCTGTACGTGCTCGTGATGAC-3’；

所述探针PRV-gE-Probe为exo探针，所述探针PRV-gE-Probe自5’端起第33位碱基T标记FAM发光基团，第34位碱基G被四氢呋喃THF代替，第35位碱基T标记BHQ1淬灭基团，3’端进行C3-spacer阻断修饰，

标记后的所述探针PRV-gE-Probe的序列如下：

5’-GCACACGAACGCCACCGCGGACGAGTCGGGGC(FAM-dT)(THF)(BHQ1-dT)ACGTGCTCGTGATGAC[C3-spacer]-3’；

其中，所述上游引物PRV-gE-F的序列参考PRV HB1201毒株的gE基因的第984-1017位，所述下游引物PRV-gE-R的序列参考PRV HB1201毒株的gE基因的第1092-1124位，所述探针PRV-gE-Probe的序列PRV HB1201毒株的gE基因的第1023-1073位。

2.一种检测猪伪狂犬病病毒的RAA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的RAA引物对和探针组合。

3.根据权利要求2所述的检测猪伪狂犬病病毒的RAA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含适宜于重组酶介导等温扩增反应的试剂体系，以及荧光基础反应单元。

4.根据权利要求3所述的检测猪伪狂犬病病毒的RAA试剂盒，其特征在于，所述试剂体系包括反应缓冲液、去核酸酶水和醋酸镁。

5.根据权利要求3或4所述的检测猪伪狂犬病病毒的RAA试剂盒，其特征在于，所述荧光基础反应单元包含单链DNA结合蛋白、重组酶和聚合酶。

6.根据权利要求2-4任一项所述的检测猪伪狂犬病病毒的RAA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

反应缓冲液A Buffer 14.7μL；

10pmol/μL PRV-gE-F 1μL；

10pmol/μL PRV-gE-R 1μL；

10pmol/μL PRV-gE-Probe 0.6μL；

去核酸酶水 4.45μL；

DNA模板 2μL；

醋酸镁B Buffer 1.25μL。