[发明专利]一种基于高通量测序精准检测T细胞免疫组库的方法及其引物体系

权利要求书

1.一种基于高通量测序精准检测T细胞免疫组库的引物体系，其特征在于，包括PCR1引物和PCR2引物，所述PCR1包括上游V引物和下游J引物，测序接头序列和分子标签序列分别插入到所述PCR1上、下游引物的目标区域；所述PCR2引物以PCR1产物为模板，引入测序引物序列和index标签；

所述PCR1引物序列的上游V基因引物和下游J基因引物的测序接头序列为长度为22个核苷酸序列组成的序列条码，其碱基序列为CTACACGACGCTCTTCCGATCT，如SEQ ID NO.1所示；

所述PCR1引物序列的上游V基因引物的分子标签序列为含有4个随机碱基的NNCCCNN序列；下游J基因引物的分子标签序列为含有4个随机碱基的NNGGGNN序列；N表示A、T、C和G中任意一种碱基，不同位置的N为相同或不同的碱基；

所述PCR1上游V基因引物结构从5’端到3’端均依次为：长臂段目标区域捕获引物+测序接头序列+分子标签+短臂目标区域捕获引物；所述PCR1下游J基因引物结构从5’端到3’端均依次为：长臂段目标区域捕获引物+测序接头序列+分子标签+短臂目标区域捕获引物；

所述PCR1上游V基因引物有45条，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4-48所示，所述PCR1下游J基因引物有16条，其核苷酸序列如SEQ ID NO.49-64所示。

2.如权利要求1所述一种基于高通量测序精准检测T细胞免疫组库的引物体系，其特征在于，所述PCR1上游V基因引物包括：P1-TRBV2、P1-TRBV3-1、P1-TRBV4-1、P1-TRBV4-2,3、P1-TRBV5-1、P1-TRBV5-3、P1-TRBV5-4,5,6,7,8、P1-TRBV6-1、P1-TRBV6-2,3、P1-TRBV6-4、P1-TRBV6-5、P1-TRBV6-6、P1-TRBV6-7、P1-TRBV6-8、P1-TRBV6-9、P1-TRBV7-1、P1-TRBV7-2、P1-TRBV7-3、P1-TRBV7-4、P1-TRBV7-6、P1-TRBV7-7、P1-TRBV7-8、P1-TRBV7-9、P1-TRBV9、P1-TRBV10-1、P1-TRBV10-2、P1-TRBV10-3、P1-TRBV11-1,3、P1-TRBV11-2、P1-TRBV12-3,4,5、P1-TRBV13、P1-TRBV14、P1-TRBV15、P1-TRBV16、P1-TRBV17、P1-TRBV18、P1-TRBV19、P1-TRBV20-1、P1-TRBV23-1、P1-TRBV24-1、P1-TRBV25-1、P1-TRBV27、P1-TRBV28、P1-TRBV29-1和P1-TRBV30；所述PCR1下游J基因引物包括：P1-TRBJ1.1、P1-TRBJ1.2、P1-TRBJ1.3、P1-TRBJ1-4、P1-TRBJ1.5、P1-TRBJ1.6、P1-TRBJ2.1、P1-TRBJ2.2、P1-TRBJ2.3、P1-TRBJ2.4、P1-TRBJ2.5和P1-TRBJ2.6。

3.如权利要求1所述一种基于高通量测序精准检测T细胞免疫组库的引物体系，其特征在于，所述PCR2引物中引入的index标签序列为8个碱基组成的标签序列。

4.如权利要求3所述一种基于高通量测序精准检测T细胞免疫组库的引物体系，其特征在于，所述PCR2上游引物结构从5’端到3’端均依次为：测序引物序列+接头序列，碱基序列为AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACT CTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT，如SEQ ID NO.2所示；所述PCR2下游引物结构从5’端到3’端均依次为：测序引物序列+index标签+接头序列，碱基序列为CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATXXXXXXXXGTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT。

5.如权利要求4所述一种基于高通量测序精准检测T细胞免疫组库的引物体系，其特征在于，所述PCR1上游V基因引物和下游J基因引物的测序接头序列分别与PCR2上、下游引物的接头序列互补。