[发明专利]一种恒温发酵的液态乳酸菌及制备方法和应用

权利要求书

1.一种恒温发酵的液态乳酸菌，其特征在于，包括6×10¹⁰-7×10¹⁰CFU/L的粪肠球菌、3×10¹⁰-4×10¹⁰CFU/L的植物乳杆菌、4×10¹⁰-5×10¹⁰CFU/L的戊糖片球菌和5-6g/Kg的乳酸，余量为水。

2.一种权利要求1所述的恒温发酵的液态乳酸菌的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.在容器中加入水，再加入植物乳杆菌和戊糖片球菌；

S2.再加入培养基，进行搅拌，加热，保持恒温，进行扩培；

S3.当pH值降到4.5时，关闭加热；

S4.再加入粪肠球菌搅拌，制备完成。

3.根据权利要求2所述的恒温发酵的液态乳酸菌的制备方法，其特征在于，步骤S1中植物乳杆菌的浓度为5×10⁷-6×10⁷CFU/L，戊糖片球菌的浓度为5×10⁷-6×10⁷CFU/L。

4.根据权利要求3所述的恒温发酵的液态乳酸菌的制备方法，其特征在于，所述植物乳杆菌和戊糖片球菌的小肠上皮粘膜定植力均大于81％，所述小肠上皮粘膜定植力测试的实验过程为:打开动物腹腔，无菌取空肠回肠，用无菌生理盐水冲洗肠腔，剪开，取粘液，保存备用，取12孔细胞培养板，实验组各加粘液，每种粘液平行3个孔，过夜固定，然后每孔加生理盐水洗涤，除去未粘附的粘液，每孔加等量植物乳杆菌或戊糖片球菌的菌悬液，每孔粘液与菌悬液等体积，另以植物乳杆菌或戊糖片球菌的菌悬液作阳性对照，进行孵育，除阳性对照外，再用生理盐水洗去未粘附细菌，将吸出的悬液和每次的洗涤液都装入离心管中，以备计数，计算出未粘附的总菌量，最后计算出该菌粘附的百分率即为所述植物乳杆菌或戊糖片球菌的小肠上皮粘膜定植力。

5.根据权利要求3所述的恒温发酵的液态乳酸菌的制备方法，其特征在于，所述植物乳杆菌和戊糖片球菌在pH＝3、3小时的存活率均大于72％，在pH＝2.5、3小时的存活率均大于66％；

所述植物乳杆菌和戊糖片球菌在0.2％胆盐浓度的存活率均高于86％，在0.3％胆盐浓度的存活率均高于80％。

6.根据权利要求2所述的恒温发酵的液态乳酸菌的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述培养基包括以下重量百分数的组分：红糖35％-55％、工业级蛋白胨25％-45％、酵母浸膏15％-25％、葡萄糖2.0-2.1％、磷酸氢二钾0.2-0.25％、乙酸钠0.5-0.6％、柠檬酸铵0.2-0.25％、硫酸镁0.02-0.03％、硫酸锰0.05-0.06％。

7.根据权利要求6所述的恒温发酵的液态乳酸菌的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述培养基包括以下重量百分数的组分：红糖42.03％、工业级蛋白胨35％、酵母浸膏20％、葡萄糖2.0％、磷酸氢二钾0.2％、乙酸钠0.5％、柠檬酸铵0.2％、硫酸镁0.02％、硫酸锰0.05％；

工业级蛋白胨的指标为：以干基计总氮量≥13％，以干基计氨基氮≥2.0％，以干基计灰份≤10％，水份≤6.0％，2％水溶液pH值4.5-7.0；

所述酵母浸膏的指标为：水份≤35％，总氮≥11％，氨基酸态氮≥4％，灰份≤15％，pH值4.0-7.0。

8.根据权利要求2所述的恒温发酵的液态乳酸菌的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述搅拌的速度为100-150rpm。

9.根据权利要求2所述的恒温发酵的液态乳酸菌的制备方法，步骤S2中所述加热为加热至36.5-37℃，恒温温度为36.5-37℃。

10.一种权利要求1所述的一种恒温发酵的液态乳酸菌的应用，其特征在于，所述恒温发酵的液态乳酸菌的应用方式为以下方式中的一种：

(1)在养殖场饮用水中添加饮用；

(2)在固体饲料中拌料使用；

(3)用于养殖场的场地杀菌，在使用时，所述恒温发酵的液态乳酸菌与水按照重量比为1：(95-105)进行稀释。