[发明专利]一种封闭试剂及利用其封闭免疫反应载体的方法

说明书

本发明涉及免疫测定的技术领域，尤其涉及一种封闭试剂及利用其封闭免疫反应载体的方法。本发明的封闭试剂包含以下组分：磷酸盐缓冲液、蛋白、糖、盐类和防腐剂，所述磷酸盐缓冲液中磷酸盐的浓度为10～50mmol/L，pH为7.9±0.1。本发明的封闭试剂不仅能有效对免疫反应载体进行封闭，降低了本底，提高了分辨率、灵敏度、精密度和特异性，还能有效保护了免疫反应载体上抗原或抗体的生物活性，提高了热稳定性和货架期稳定性。该免疫反应载体的封闭方法能缩短封闭时间，进而缩短工期，有效控制了免疫反应的本底值，保证了灵敏度，并有效保护了免疫反应载体上抗原或抗体的活性，提高了免疫反应载体批内和批间的精密度。

技术领域

本发明涉及免疫测定的技术领域，尤其涉及一种封闭试剂及利用其封闭免疫反应载体的方法。

背景技术

免疫反应载体的封闭是继抗原或抗体包被在载体上之后，再用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。抗原或抗体包被时所用的浓度较低，吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙，既往仅为了有效地控制本底或背景，采用封闭操作让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥在免疫反应其后的步骤中干扰物质的非特异再吸附。对于一步法试剂盒或间接法免疫测定中几乎是不可缺的。

理想的封闭液应满足以下条件：①抑制待测物质与固相载体表面的非特异性结合；②抑制非特异性蛋白-蛋白相互作用；③不与其后加入的试剂(抗体、蛋白A等)发生交叉反应；④能减少待测物质因相转变而发生的蛋白变性或帮助其复性；⑤与酶及可影响测定结果的其他物质的反应性低；⑥不会引起特异性蛋白或活性分子与固相载体表面的脱结合；⑦与固相载体表面的结合牢固，批间重复性好。

传统方法最常用的封闭试剂是0.05％～3.0％的牛血清白蛋白，或10％全血清(小牛血清、山羊血清等)，或1％～10％的明胶，或0.1％～5％的低(脱)脂奶粉，5％酪蛋白等。目前这些封闭试剂对免疫反应载体封闭后，仍有可能存在本底高，分辨率差，灵敏度低，精密度差，特异性差，载体上的抗原或抗体易失活，热稳定性差，货架期短等问题。特别是免疫反应载体封闭不当反而会使本底升高或者灵敏度降低。因此为了解决以上问题，需要一种优化的封闭试剂和免疫反应载体的封闭方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种封闭试剂及利用其封闭免疫反应载体的方法，本发明的封闭试剂不仅能有效对免疫反应载体进行封闭，降低了本底，提高了分辨率、灵敏度、精密度和特异性，还能有效保护了免疫反应载体上抗原或抗体的生物活性，提高了热稳定性和货架期稳定性。该免疫反应载体的封闭方法能缩短封闭时间，进而缩短工期，有效控制了免疫反应的本底值，保证了灵敏度，并有效保护了免疫反应载体上抗原或抗体的活性，提高了免疫反应载体批内和批间的精密度。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：提供一种封闭试剂，所述封闭试剂包含以下组分：磷酸盐缓冲液、蛋白、糖、盐类和防腐剂，所述磷酸盐缓冲液中磷酸盐的浓度为10～50mmol/L，pH为7.9±0.1。

优选的，所述磷酸盐缓冲液中磷酸盐的浓度为20mmol/L。

作为本发明所述的封闭试剂的优选实施方式，所述蛋白包括牛血清白蛋白、小牛血清、明胶、低脂奶粉、酪蛋白和蛋白胨中的至少一种。

作为本发明所述的封闭试剂的优选实施方式，所述蛋白胨包括骨肉(牛)蛋白胨、大豆蛋白胨、鱼蛋白胨、胰蛋白胨中的至少一种。

优选的，所述胰蛋白胨为胰骨肉(牛)蛋白胨和胰酪蛋白胨中的至少一种。进一步的，优选胰酪蛋白胨，且胰酪蛋白胨中的氨基氮含量需≥3％，色氨酸含量需≥0.8％，胨含量需≥80％，其使用量为0.5％～10％，优选为1％。

作为本发明所述的封闭试剂的优选实施方式，所述糖包括葡萄糖、乳糖、蔗糖、海藻糖和山梨醇中的至少一种。