[发明专利]一种诊断受试者是否患阿尔茨海默病的试剂盒及其用途

说明书

本申请具体涉及一种诊断受试者是否患阿尔茨海默病的试剂盒，以及用于确定生物样品中生物标志物水平的试剂在制备试剂盒中的用途。本申请的方法能够替代传统的脑脊液的p‑tau/Aβ检测，通过7种miRNA实现对AD的诊断，并且，不仅能够区分AD患者与正常人员，还能够区分AD患者与其他痴呆患者。

技术领域

本申请涉及医药领域、病毒学领域和免疫学领域，特别是免疫学诊断领域。本申请具体涉及一种诊断受试者是否患阿尔茨海默病的试剂盒，以及用于确定生物样品中生物标志物水平的试剂在制备试剂盒中的用途。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)最常见的生物标志物是Aβ和tau，它们可以通过脑脊液或PET成象检验。然而这个过程是有创的，且非常昂贵，难以在人群中普遍应用。此外，AD与其他类型的痴呆，如血管性痴呆(VaD)、帕金森病性痴呆(PDD)、行为变异性额颞叶痴呆(bvFTD)、路易体痴呆(DLB)等，可能存在重叠的临床表现、病理和生物标志物，往往导致临床诊断困难。

miRNA是一种长度约为20-25个核苷酸的短的非编码RNA，与miRNA靶标的3'非翻译区(UTR)互补位点结合抑制其表达。越来越多的研究证实了miRNAs与AD之间的关系。miRNAs调控APP的表达和参与APP代谢的蛋白，如α-分泌酶、ADAM10、β-分泌酶和BACE1。miRNAs也在Aβ清除中发挥重要作用：例如，miRNAs可以下调ApoE脂化和TREM2水平，并削弱脑内Aβ代谢。此外，miRNA水平与脑内tau蛋白的表达和过度磷酸化相关，并参与AD其他相关机制，如线粒体功能异常、自噬、线粒体自噬、神经递质释放和清除和突触可塑性。以往的研究样本量小，且未经脑脊液核心标志物证实临床诊断，限制了其临床转化。

基于上述问题，AD的临床治疗急需一种可有效诊断AD及鉴别AD与其他类型痴呆的方法。

发明内容

本申请发明人通过检测AD患者血液中的miRNA水平，发现了7个与p-tau/Aβ比例有显著相关性的miRNA，通过这7种miRNA建立了AD患者脑脊液p-tau/Aβ比例预测计算模型，并在两个独立人群中验证了该模型的诊断效能，证实了由血液中7种miRNA组成的模型能够准确预测脑脊液中P-tau/Aβ42的比值。因此，这7种miRNA有助于AD的诊断，并且，可以区分AD患者和其他类型痴呆。

因此，在第一方面，本申请提供了一种用于诊断受试者是否患阿尔茨海默病的方法，其包括：

(1)从受试者获得包含生物标志物的生物样品；

(2)测定生物样品中生物标志物的水平；和

(3)基于所述生物标志物的水平，诊断受试者是否患阿尔茨海默病；

其中，所述生物标志物为miR-139-3p，miR-143-3p，miR-146a-5p，miR-485-5p，miR-10a-5p，miR-26b-5p和miR-451a-5p。

在某些实施方案中，所述生物样品选自全血(例如，外周血)，血清，血浆或脑脊液。

在某些实施方案中，所述生物样品选自全血(例如，外周血)，血清和血浆。在某些实施方案中，在进行步骤(2)之前，对所述生物样品进行预处理，以获得外泌体；然后进行步骤(2)，即，测定外泌体中生物标志物的水平。对生物样品(例如全血，血清和血浆)进行处理以获得外泌体的方法是本领域技术人员已知的。例如，可使用商业化的试剂盒(例如ExoQuick、Exoeasy)从生物样品(例如全血，血清和血浆)中分离获得外泌体。

在某些实施方案中，在步骤(3)中，通过将所述生物标志物的水平与参考值进行比较，从而诊断受试者是否患阿尔茨海默病。