[发明专利]一株通过还原TCA途径生产己二酸的工程菌株及其构建方法

权利要求书

1.一株产己二酸的工程菌株，其特征在于，以大肠杆菌为出发菌株，过表达编码琥珀酰辅酶A合成酶α亚基的基因sucD，编码富马酸还原酶的基因frdABCD；所述大肠杆菌为E. coli Mad1415；所述基因sucD的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述基因frdABCD的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述工程菌株是以pACM4G质粒为载体；所述pACM4G载体是以质粒pACM4为模板，将氯霉素抗性基因CmR替换为庆大霉素抗性基因GmR；

所述pACM4G质粒上还含有编码如SEQ ID NO.6所示启动子P_ffs的核苷酸序列、编码核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示所的启动子P_fnrF8、编码如SEQ ID NO.7所示启动子P_c的核苷酸序列、编码如SEQ ID NO.5所示FNR基因的核苷酸序列；

所述启动子P_fnrF8诱导表达基因sucD和frdABCD，所述启动子P_ffs诱导表达富马酸硝酸盐还原蛋白FNR基因，所述P_c启动子诱导表达基因GmR；

所述过表达的基因sucD、frdABCD在pACM4G质粒的Nde I/Xho I位点以单顺反子结构进行组合串联表达。

2.根据权利要求1所述的工程菌株，其特征在于，还过表达了编码丙酮酸羧化酶的基因pyc；所述基因pyc的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求2所述的菌株，其特征在于，所述过表达的基因sucD、frdABCD和pyc在pACM4G质粒的Nde I/Xho I位点以单顺反子结构进行组合串联表达。

4.一种生产己二酸的方法，其特征在于，应用权利要求1-3任一所述的工程菌株进行发酵。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，是将权利要求1-3任一所述的工程菌进行发酵，初始添加葡萄糖，前期好氧发酵，待葡萄糖耗尽，进行厌氧发酵，并补充葡萄糖。

6.权利要求1~3任一所述工程菌株或权利要求4或5所述方法在己二酸合成中的应用。