[发明专利]一种用于检测端粒酶的方法及其专用试剂盒在审
| 申请号： | 202110207630.6 | 申请日： | 2021-02-25 |
| 公开（公告）号： | CN112921068A | 公开（公告）日： | 2021-06-08 |
| 发明（设计）人： | 程龙;叶棋浓;王瑞官;金蕊;李江波 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/48 | 分类号： | C12Q1/48;C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 何叶喧 |
| 地址： | 100085*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 端粒 方法 及其 专用 试剂盒 | ||
1.一种检测端粒酶活性的方法，包括如下步骤：
(1)取供试生物样本，进行细胞裂解，得到细胞裂解液；
(2)取所述细胞裂解液，通过免疫沉淀进行端粒酶的纯化，得到含有纯化后端粒酶的溶液，称为纯化端粒酶溶液；
(3)制备反应体系，进行延伸反应；所述反应体系中含有5’端具有生物素标记的引物、dNTP、KCl和所述纯化端粒酶溶液；
(4)收集延伸反应产物；
(5)依次进行电泳、转膜、紫外交联和信号检测，以特征条带的多少和/或信号强弱来反应供试生物样本的端粒酶活性。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述生物样本为细胞样本。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述细胞样本进行细胞裂解前先进行如下预处理：32℃培养1-3天。
4.如权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：步骤(3)中的反应体系中，KCl浓度为200mM-250mM。
5.如权利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于：免疫沉淀中采用hTERT抗体。
6.如权利要求1至5中任一所述的方法，其特征在于：5’端具有生物素标记的引物为Bio-L-18GGG。
7.如权利要求1至6中任一所述的方法，其特征在于：收集延伸反应产物采用链霉亲和素标记的磁珠。
8.一种用于检测端粒酶活性的试剂盒，包括如下组件：
组件甲，用于进行细胞裂解；
组件乙，用于进行端粒酶的纯化；
组件丙，用于进行端粒酶催化的延伸反应；
组件丁，用于收集延伸反应的产物。
9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括记载有权利要求1至7中任一所述方法的载体。
10.权利要求8或9所述试剂盒在检测检测端粒酶活性中的应用。
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