[发明专利]基于RCA-PCR-CRISPR-cas13a检测HBV cccDNA的试剂盒在审
| 申请号： | 202110200329.2 | 申请日： | 2021-02-23 |
| 公开（公告）号： | CN114959108A | 公开（公告）日： | 2022-08-30 |
| 发明（设计）人： | 任锋;张向颖;田原;徐玲;李浩;段钟平;李伟华;陈德喜 | 申请（专利权）人： | 首都医科大学附属北京佑安医院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12N15/113;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 何叶喧 |
| 地址： | 100069 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 rca pcr crispr cas13a 检测 hbv cccdna 试剂盒 | ||
1.一种核酸分子组合物，包括特异引物对和特异crRNA；
特异引物对由序列表的序列10所示的单链DNA分子和序列表的序列11所示的单链DNA分子组成；
特异crRNA为序列表的序列9所示的单链RNA分子。
2.一种核酸分子组合物，由特异引物组、特异引物对和特异crRNA组成；
特异引物组由8种引物组成，每种引物均为单链DNA分子，8种引物依次如序列表的序列1至序列8所示；
特异引物对由序列表的序列10所示的单链DNA分子和序列表的序列11所示的单链DNA分子组成；
特异crRNA为序列表的序列9所示的单链RNA分子。
3.一种用于检测HBV cccDNA的试剂盒，包括权利要求1或2所述的核酸分子组合物。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括不降解质粒的ATP依赖的DNA酶。
5.如权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括LwCas13a蛋白。
6.如权利要求3或4或5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括记载有检测方法的载体；所述检测方法包括如下步骤：
(1)提取受试者肝脏组织的总DNA，然后进行PSAD消化；
(2)取步骤(1)的产物溶液，采用权利要求2中所述的特异引物组进行RCA扩增；
(3)取步骤(2)的产物溶液，采用权利要求2中所述的特异引物对进行PCR扩增；
(4)取步骤(3)的产物溶液，进行基于CRISPR-Cas13a系统的可视化检测；所述CRISPR-Cas13a系统的crRNA为权利要求2中所述的特异crRNA。
7.权利要求1或2所述核酸分子组合物在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为检测HBV cccDNA。
8.组件1、组件2和组件3在在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为检测HBVcccDNA；
所述组件1为权利要求1或2所述核酸分子组合物；
所述组件2为不降解质粒的ATP依赖的DNA酶；
所述组件3为LwCas13a蛋白。
9.权利要求1或2所述核酸分子组合物在检测HBV cccDNA中的应用。
10.一种检测HBV cccDNA的方法，包括如下步骤：
(1)提取受试者肝脏组织的总DNA，然后进行PSAD消化；
(2)取步骤(1)的产物溶液，采用权利要求2中所述的特异引物组进行RCA扩增；
(3)取步骤(2)的产物溶液，采用权利要求2中所述的特异引物对进行PCR扩增；
(4)取步骤(3)的产物溶液，进行基于CRISPR-Cas13a系统的可视化检测；所述CRISPR-Cas13a系统的crRNA为权利要求2中所述的特异crRNA。
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