[发明专利]基于RAA-CRISPR-Cas13a技术检测乙型肝炎病毒DNA的试剂盒

权利要求书

1.用于检测乙型肝炎病毒DNA的成套引物组，由RAA引物对和crRNA组成；

所述RAA引物对是根据SEQ ID No.1所示核苷酸序列设计的；

所述crRNA包括锚定序列和向导序列，所述锚定序列能够与Cas蛋白结合，所述向导序列与所述RAA引物对的扩增产物序列相匹配。

2.根据权利要求1所述的成套引物组，其特征在于：所述RAA引物对为能够以乙型肝炎病毒DNA为模板扩增得到SEQ ID No.1的第13-134位所示DNA片段的引物对；和/或

所述crRNA中，所述锚定序列为SEQ ID No.10的第1-38位，所述向导序列为SEQ IDNo.10的第39-66位。

3.根据权利要求2所述的成套引物组，其特征在于：所述RAA引物对为由SEQ ID No.3和SEQ ID No.9所示的两条单链DNA组成的引物对；和/或

所述crRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示。

4.用于检测乙型肝炎病毒DNA的试剂盒，含有权利要求1-3中任一所述的成套引物组。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有Cas13a蛋白。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述Cas13a蛋白为LwCas13a蛋白。

7.根据权利要求4-6中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括1)RAA反应试剂或RPA反应试剂；和/或，2)NTP、T7 RNA聚合酶、RNA酶抑制剂、报告RNA。

8.如下任一物质：

P1、权利要求1-3任一中所述的RAA引物对；

P2、权利要求1-3任一中所述的crRNA；

P3、权利要求1-3任一中所述的crRNA和Cas蛋白，或者二者形成的复合体。

9.权利要求1-3中任一所述的成套引物组或权利要求4-7中任一所述的试剂盒或权利要求8所述物质在如下任一中的应用：

Q1、制备用于检测乙型肝炎病毒DNA的产品，或检测乙型肝炎病毒DNA；

Q2、制备用于检测或辅助检测待测样本中是否含有乙型肝炎病毒DNA的产品，或检测或辅助检测待测样本中是否含有乙型肝炎病毒DNA；

Q3、制备用于筛查目标个体是否携带乙型肝炎病毒的产品，或筛查目标个体是否携带乙型肝炎病毒；

Q4、制备用于诊断乙型肝炎的产品，或诊断乙型肝炎；

Q5、制备用于筛选或辅助筛选乙型肝炎病毒防治药物的产品，或筛选或辅助筛选乙型肝炎病毒防治药物。

10.一种检测或辅助检测待测样本中是否含有乙型肝炎病毒DNA的方法，包括如下步骤：

(a1)从待测样本中提取DNA；

(a2)以(a1)提取的DNA为模板，采用权利要求1-3任一中所述的RAA引物对进行RAA扩增或RPA扩增，得到扩增产物；

(a3)取(a2)所得扩增产物，加入NTP、T7 RNA聚合酶、RNA酶抑制剂、报告RNA、权利要求5或6中所述的Cas蛋白和权利要求1-3任一中所述的crRNA，形成反应体系；将所述反应体系进行CRISPR反应检测，读取检测信号，根据检测信号按照如下确定检测结果：

若所述反应体系的检测信号为阳性，则所述待测样本中含有或候选含有乙型肝炎病毒DNA；若所述反应体系的检测信号为阴性，则所述待测样本中不含有或候选不含有乙型肝炎病毒DNA。