[发明专利]一种肾透明细胞癌circRNA生物标志物、筛选方法和诊断试剂盒

说明书

本发明公开了一种肾透明细胞癌circRNA生物标志物、筛选方法和诊断试剂盒。本发明提供的肾透明细胞癌血清circRNA生物标志物，在肾透明细胞癌组织和血清中的表达一致，均表现异常显著降低，是血清样本诊断肾透明细胞癌的非常可靠的标志物，为临床肾透明细胞癌诊断提供了新途径。本发明提供的试剂盒，使肾透明细胞癌的临床诊断简便快捷、诊断结果可靠。

技术领域

本发明具体涉及一种肾透明细胞癌circRNA生物标志物、筛选方法和诊断试剂盒。

背景技术

肾细胞癌(简称肾癌)是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一。肾癌最常见的组织学亚型是肾透明细胞癌，约占80-90％。目前，部分和根治性肾切除术被认为是肾透明细胞癌的主要治疗方法。虽然肾透明细胞癌的筛查、诊断和治疗有所改善，但肾透明细胞癌患者的局部或远处转移率较高，预后很差，5年生存率低于10％。值得注意的是，肾透明细胞癌患者一旦出现癌症复发转移的情况，就意味着预后会很不理想，导致肾透明细胞癌的治愈率就会大大降低。针对术后复发的肾透明细胞癌患者，临床上通常协同使用酪氨酸激酶抑制剂、mTOR抑制剂等靶向药物，尽管如此，患者的总生存期变化不明显。因此，寻找更合适的生物标志物用以识别并鉴定肾透明细胞癌患者，甚至是区分肾透明细胞癌恶性程度、监测肾透明细胞癌早期复发、预后等具有重要意义。但是目前尚未找到用于肾透明细胞癌早期诊断和预后随访生物标志物。

而目前已有的研究显示环状RNA(circRNA)有可能会成为一种潜在的早期诊断和治疗肾透明细胞癌的新途径。

但是目前circRNA在肾透明细胞癌领域的相关研究报道非常欠缺，还没有用于肾透明细胞癌诊断的较为稳定的生物标志物以及检测肾透明细胞癌血清中circRNA的相关报道。因此寻找一种灵敏度高、操作简便且成本低廉的检测方法是目前血清circRNA在肿瘤临床检测中亟待解决的问题。

此外，若能筛选出肾透明细胞癌异常表达的血清circRNA作为生物标志物，并研制相应的诊断试剂盒，对我国肾透明细胞癌的诊断现状必将是一次有力的推动。

迄今为止，尚未发现可靠的circRNA生物标志物用于肾透明细胞癌的诊断。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本发明提供一种肾透明细胞癌circRNA生物标志物及其筛选方法。

为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

一种肾透明细胞癌circRNA生物标志物，包括hsa_circ_0009267。hsa_circ_0009267的相关信息如图8所示，编码所述circRNA生物标志物的DNA序列如SEQ ID NO.3所示。

一种肾透明细胞癌circRNA生物标志物的筛选方法，包括以下步骤：

(1)采集正常体检人群和肾透明细胞癌患者的血清样本，并对血清样本进行处理；

(2)对步骤(1)得到的血清样本进行circRNA芯片分析；

(3)根据步骤(2)得到的circRNA芯片结果，绘制火山图以及层次聚类热图进行分析，筛选出综合分析结果最优、差异表达最显著的circRNA作为候选circRNA；

(4)收集肾透明细胞癌患者的组织样本，提取组织样本中总RNA，进行RNA逆转录反应，采用SYBR Green法进行实时荧光定量PCR检测circRNA的表达水平，筛选出肾透明细胞癌组织相对癌旁组织中表达阈值2以上且与circRNA芯片结果一致的circRNA；

(5)检验步骤(4)筛选出的circRNA在肾透明细胞癌患者血清和肾透明细胞癌组织中的表达一致性，表达一致的，则该circRNA为目标生物标志物。