[发明专利]一种蛋白核小球藻抗氧化肽及其制备方法

说明书

本发明公开了一种蛋白核小球藻抗氧化肽及其制备方法，以蛋白核小球藻为原料，通过蛋白核小球藻粉破壁处理，提取小球藻蛋白，制备小球藻多肽，分离纯化小球藻多肽，冷冻干燥，得到蛋白核小球藻抗氧化肽。所述抗氧化肽的氨基酸序列为∶VPADDL。本发明采用酶解法超声辅助提取小球藻蛋白，含盐量低，蛋白提取率高。使用多种酶制备小球藻抗氧化肽，以羟基自由基的清除率作为判别指标，能更精准的用于小球藻抗氧化肽的制备。采用截留分子量3000Da的超滤膜制备藻多肽，为下一步色谱分离获得更纯的藻抗氧化肽提供了方便条件。根据藻多肽分子量大小的不同采用凝胶层析分离方式，所得到的藻多肽纯度更高。

技术领域

本发明涉及一种蛋白核小球藻抗氧化肽及其制备方法。

背景技术

传统的合成抗氧化剂有可能引起一些不可预期的副作用，消费者对人工抗氧化剂在食品安全方面的顾虑很多，绿色健康食品日益受到消费者的关注，蛋白核小球藻(chlorella pyrenoidosa)是单细胞绿色微藻，广泛分布于淡水和海水中。小球藻因富含蛋白质、膳食纤维、脂质、维生素、叶绿素和类胡萝卜素以及活性代谢产物而备受关注。此外，小球藻还具有出色的免疫调节作用，抗氧化能力以及降血糖和降血脂作用，被联合国粮食及农业组织(FAO)评为“绿色健康食品”。蛋白核小球藻抗氧化肽是一种天然抗氧化剂，目前，我国对澡蛋白利用率偏低，其制备方法复杂，提取的小球藻蛋白，含盐量偏高，且蛋白提取率低，纯度低等缺点。

发明内容

为解决上述现有技术的不足，本发明提供一种蛋白核小球藻抗氧化肽及其制备方法，该抗氧化肽具有良好的抗氧化能力。对科技、经济和食品业的发展将具有重要意义。

本发明所采用的技术方案是一种蛋白核小球藻抗氧化肽，所述肽的氨基酸序列为∶VPADDL。

一种蛋白核小球藻抗氧化肽的制备方法，包括以下步骤∶(1)蛋白核小球藻粉破壁处理；(2)小球藻蛋白提取；(3)小球藻多肽制备；(4)小球藻多肽的分离纯化。

进一步地，所述的步骤(1)中蛋白核小球藻粉的具体破壁方法为∶将小球藻粉过60目筛去除杂物，藻粉与纯净水的液料比为10：1；超声30min，细胞破碎仪处理15min(3/2s)后，冷冻干燥为破壁小球藻粉，装袋备用。

进一步地，所述的步骤(2)中小球藻蛋白提取的具体方法为∶称取破壁小球藻粉，按照质量体积比1∶30的比例加入纯水，并充分搅拌溶胀，调节pH至5.0，酶解温度50℃，加入1％纤维素酶酶解3h,酶解结束后升温至100℃灭酶10min,后于超声功率480w超声辅助提取40分钟，再均质10分钟，8000r/min离心10分钟，取沉淀冷冻干燥，即得小球藻藻蛋白。

进一步地，所述的步骤(3)中小球藻藻多肽制备的具体方法为∶称取小球藻藻蛋白，加20倍的纯水溶解，加3％碱性蛋白酶，调pH至8.0、酶解温度60℃，酶解时间6h，酶解结束后升温至100℃灭酶10min，调节pH至2.0，酶解温度37℃，加入2％胃蛋白酶酶解2h,调节pH至7.5，酶解温度37℃，加入2％胰酶酶解2h,酶解结束后升温至100℃灭酶10min,得到小球藻藻多肽酶解液，冷藏备用。

进一步地，所述的步骤(4)小球藻多肽的分离纯化的具体方法为∶用截留分子量3000Da的超滤膜制备分子量小于3000Da的小球藻多肽溶液；将多肽溶液60℃真空浓缩后冷冻干燥，得到分子量小于3000Da的小球藻多肽；将分子量小于3000Da的小球藻多肽用SephadexG-15凝胶层析进行分离，即得到所述小球藻抗氧化肽。

本发明的有益效果是：本发明采用酶解法超声辅助提取小球藻蛋白，含盐量低，蛋白提取率高。使用多种酶制备小球藻抗氧化肽，以羟基自由基的清除率作为判别指标，能更精准的用于小球藻抗氧化肽的制备。采用截留分子量3000Da的超滤膜制备藻多肽，为下一步色谱分离获得更纯的藻抗氧化肽提供了方便条件。根据藻多肽分子量大小的不同采用凝胶层析分离方式，所得到的藻多肽纯度更高。

附图说明