[发明专利]一种新冠病毒重组蛋白包涵体的复性方法

说明书

本发明一种新冠病毒重组蛋白包涵体的复性方法，包括以下步骤，步骤S1:将新冠病毒重组蛋白包涵体溶解得到包涵体溶解产物；步骤S2：将所述包涵体溶解产物进行柱层析纯化，得到纯化新冠病毒重组蛋白；步骤S3：将纯化新冠病毒重组蛋白制备成新冠病毒重组蛋白溶液液，所述新冠病毒重组蛋白溶液中，蛋白质的浓度为0.6mg/ml～1.0mg/ml，含尿素的浓度为4mol/L～4.5mol/L；步骤S4:将所述新冠病毒重组蛋白溶液依次采用第一复性液及第二复性液进行梯度稀释复性，得到新冠病毒重组蛋白复性液；步骤S5：将所述新冠病毒重组蛋白复性液进行后处理即得复性蛋白产品；本发明的有益效果在于蛋白回收率高且利于工业化的生产。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种新冠病毒重组蛋白包涵体的复性方法。

背景技术

冠状病毒引起的新冠肺炎引起了全球关注，病原体被鉴定为SARS-CoV-2，抗疫的急切形势迫切需要一种有效的预防这种病毒的疫苗。作为感染过程中最关键的步骤，SARS-CoV-2使用其刺突蛋白受体结合域(RBD)与宿主细胞受体血管紧张素转化酶2(ACE2)结合。所以RBD蛋白成为应急疫苗、治疗性抗体的研发和临床诊断的关键靶点。

蛋白质和多肽药物是生物制药行业的支柱，目前，市场上超过200个蛋白质药物正在进行临床前和临床试验。此类蛋白质药物主要以大肠杆菌为宿主菌以“重组蛋白”的形式进行表达和生产。但是在大肠杆菌中表达的目的蛋白常常以包涵体的形式沉积于细胞内，表现为无活性的不溶性聚集物，如何对包涵体蛋白进行高效率的复性以获得活性产品是生物工程产业化经常面临的一个难题。

目前常用的包涵体蛋白复性的技术主要有：透析复性、稀释复性、人工分子伴侣、柱色谱复性以及反胶团溶解复性等。上述各复性方法多少存在着种种问题，例如：透析复性将变性蛋白放入透析袋中，通过缓慢联系的降低变性剂的浓度实现蛋白复性，虽然操作简单但是耗时长，处理体积小，无法大规模工业化应用。人工分子伴侣的复性常用Hsp家族蛋白和GroES/GroEL等，人工分子伴侣能够显著提高蛋白复性率，但同时也会显著提高生产成本。柱色谱复性以及反胶团溶解复性需要材料和设备特殊、成本较高、不适用于制药工业的大量制备等，而且操作过程相对繁琐。而稀释复性虽然操作简单，器材试剂在应用于工艺生产时呈现出较好的经济性，但是稀释复性法需要包涵体蛋白在低浓度下进行，否则会导致蛋白在复性时会聚集沉淀，会回收率降低，重新浓缩困难，也不适用于工业化的生产。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供一种重组新冠蛋白包涵体的复性方法。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种新冠病毒重组蛋白包涵体的复性方法，其不同之处在于，包括以下步骤：

步骤S1:将新冠病毒重组蛋白包涵体溶解得到包涵体溶解产物；

步骤S2：将所述包涵体溶解产物进行柱层析纯化，得到纯化新冠病毒重组蛋白；

步骤S3：将纯化新冠病毒重组蛋白制备成新冠病毒重组蛋白溶液，所述新冠病毒重组蛋白溶液中，蛋白质的浓度为0.6mg/ml～1.0mg/ml，含尿素的浓度为4mol/L～4.5mol/L；

步骤S4:将所述新冠病毒重组蛋白溶液依次采用第一复性液及第二复性液进行梯度稀释复性，得到新冠病毒重组蛋白复性液；

步骤S5：将所述新冠病毒重组蛋白复性液进行后处理即得复性蛋白产品；

其中，所述第一复性液包括缓冲剂、1.5mol/L～2.5mol/L的尿素、0.5mmol/L～1.5mmol/L氧化型谷光苷肽及还原剂，所述第二复性液包括缓冲剂、0.5mmol/L～1.5mmol/L氧化型谷光苷肽及还原剂。