[发明专利]一种用于生产香草醛的基因片段、酿酒酵母工程菌及其构建方法

权利要求书

1.用于生产香草醛的基因片段，其特征在于：包括基因片段1～8；

所述基因片段1含有上游同源序列delta15-up，营养缺陷型标签，同源片段L1；

所述基因片段2含有同源片段L1，基因表达盒TDH3-Sam8-TPI1，基因表达盒ADH1-Sam5-GIT，同源片段L2；

所述基因片段3含有同源片段L2，基因表达盒TEF2-Comt-CYC1，同源片段L3；

所述基因片段4含有同源片段L3，下游同源序列delta15-down；

所述基因片段5含有上游同源序列delta17-up，抗性筛选标签，同源片段L4；

所述基因片段6含有同源片段L4，基因表达盒ENO2-fcs-LRP，同源片段L5；

所述基因片段7含有同源片段L5，基因表达盒ACT1-ech-MDM35，同源片段L6；

所述基因片段8含有同源片段L6，下游同源序列delta17-down。

2.根据权利要求1所述的基因片段，其特征在于，所述基因片段1、4、5或8的组装采用OE-PCR方法构建。

3.根据权利要求1所述的基因片段，其特征在于，所述基因片段2的组装采用Goldengate方法构建，基因Sam8和基因Sam5的启动子设计“头对头”的方式，终止子则是“脚并脚”的方式，每个连接处插入Bsa I的酶切位点。

4.根据权利要求1所述的基因片段，其特征在于，所述基因片段3、6或7的组装采用酶切连接方法构建。

5.根据权利要求1所述的基因片段，其特征在于，所述启动子TDH3、ADH1、TEF2、ENO2、ACT1和终止子TPI1、PGI、CYC1、LRP1、MDM35来源于酿酒酵母CEN.PK2-1C基因组。

6.根据权利要求1所述的基因片段，其特征在于，所述基因Sam8序列如SEQ ID NO：1所示；基因Sam5序列如SEQ ID NO：2所示；基因Comt序列如SEQ ID NO：3所示；基因fcs序列如SEQ ID NO：4；基因ech序列如SEQ ID NO：5所示。

7.一种生产香草醛的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述工程菌基因组包含权利要求1～6任意一项所述的基因片段。

8.根据权利要求7所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述酿酒酵母菌株为CEN.PK2-1C。

9.如权利要求7～8任意一项所述的酿酒酵母工程菌的构建方法，其特征在于，将基因片段1、2、3、4整合到酿酒酵母基因组上，筛选得到阳性菌株；再将基因片段5、6、7、8整合到所述阳性菌株基因组上，筛选得到生产香草醛的酵母菌株。

10.如权利要求1～6任意一项所述的基因片段或权利要求7～8任意一项所述的酿酒酵母工程菌在生产、提取、浓缩香草醛及中间产物上的应用。