[发明专利]一种AAV9病毒介导的心肌细胞特异性基因表达载体及其用途

说明书

本发明公开了一种AAV9病毒介导的心肌细胞特异性基因表达载体及其用途。本发明所要保护的一个技术方案是重组腺相关病毒在治疗和/或预防和/或缓解和/或改善心肌病中的应用，或重组腺相关病毒在制备治疗和/或预防和/或缓解和/或改善心肌病药物中的应用。所述重组腺相关病毒为表达OGA蛋白的腺相关病毒，所述OGA蛋白是氨基酸序列是序列表中序列1的蛋白质。实验证明，通过尾静脉注射所构建的重组AAV9‑cTNT‑OGA病毒载体至所构建扩张型心肌病小鼠模型中，可以有效缓解小鼠扩张型心肌病表型，达到了治疗扩张型心肌病的目的，可应用于制备治疗心肌病的药物。

技术领域

本发明涉及医学生物技术领域，具体涉及一种AAV9病毒介导的心肌细胞特异性基因表达载体及其用途。

背景技术

扩张型心肌病(DCM)是一种以左心室扩张和收缩功能障碍为特征的复杂性心肌病。四分之一至二分之一的DCM病例被认为具有遗传基础，并被归类为家族性DCM，这与编码细胞骨架蛋白、肌动蛋白和线粒体蛋白的基因突变有关。除此之外，仍有相当大一部分的扩张型心肌病的致病原因不明，称之为特发性心肌病，其分子机制有待充分阐明。

蛋白O-GlcNAc糖基化修饰是哺乳动物细胞内广泛存在的一种重要的翻译后修饰过程，许多涉及钙信号、线粒体功能和代谢的蛋白质已被证明是O-GlcNAc糖基化修饰的。机体细胞内大约2-5％的葡萄糖经由氨基己糖生物合成途径(hexosamine biosyntheticpathway，HBP)生成终产物UDP-N-乙酰基葡萄糖胺(UDP-GlcNAc)，在O-GlcNAc转移酶(OGT)的作用下实现对蛋白质丝氨酸或苏氨酸残基的O-GlcNAc糖基化修饰，而O-GlcNAc水解酶(OGA)负责去除这种修饰，通过OGT和OGA两种酶的共同调节，实现对蛋白稳定性和功能的动态调控。尽管研究证实蛋白O-GlcNAc糖基化修饰在生理及多种病理状态下对心脏的重要作用，但目前关于蛋白O-GlcNAc糖基化修饰在扩张型心肌病中的功能还未见报道，并且有关O-GlcNAc糖基化修饰的遗传调控机制还不十分明确。

蛋白精氨酸甲基化是哺乳动物细胞内广泛存在的一个重要的转录后修饰过程。蛋白精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)是蛋白精氨酸甲基转移酶家族的一个重要组分，可以催化靶蛋白精氨酸亚基对称二甲基化过程，属于II型精氨酸甲基化转移酶。随着研究深入，发现越来越多的蛋白靶标可以被PRMT5介导的对称二甲基化修饰所调控，包括组蛋白和非组蛋白。PRMT5具有转录调控、RNA加工、蛋白质功能和信号转导等多种功能。PRMT5在扩张型心肌病发生中的功能尚不明确。

腺相关病毒(AAV)是一种无包膜的线性单链DNA病毒，是基因传递和表的重要工具，具有宿主范围广、安全性高、免疫原性低等优势，是一类新型安全载体。不同血清型的AAV因识别和结合的细胞表面受体不同，具有不同的组织特异性，因而可以实现组织特异性的基因递送，逐渐成为一种理想的基因治疗载体。AAV9对心脏的亲和性较高，如构建载体时添加心脏特异性启动子会实现心脏特异性表达。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何治疗扩张型心肌病。

为了解决上述技术问题，本发明首先提供了重组腺相关病毒的下述任一种应用：

P1、所述重组腺相关病毒在治疗和/或预防和/或缓解和/或改善心肌病中的应用。

P2、所述重组腺相关病毒在制备治疗和/或预防和/或缓解和/或改善心肌病药物中的应用。

所述重组腺相关病毒为表达OGA蛋白的腺相关病毒。所述OGA蛋白是氨基酸序列是序列表中序列1的蛋白。

上述腺相关病毒含有所述OGA蛋白的编码基因。所述OGA蛋白的编码基因的编码链的编码序列是序列表中序列2的核苷酸分子。

上述腺相关病毒可为腺相关病毒载体血清型9。

上文所述腺相关病毒含有启动子。所述启动子可为序列表中序列3所示的核苷酸分子。