[发明专利]一株产表面活性素的大肠杆菌工程菌及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 202110137604.0 | 申请日： | 2021-02-01 |
| 公开（公告）号： | CN112795587B | 公开（公告）日： | 2023-08-29 |
| 发明（设计）人： | 魏韬;郭玉婧;邹苑;林俊芳;郑倩望;叶志伟 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/31;C12N1/21;C12P21/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 崔红丽 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一株产 表面活性 大肠杆菌 工程 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种产表面活性素的大肠杆菌工程菌的构建方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）分析暹罗芽孢杆菌JFL15基因组，与NCBI数据库比对，获得表面活性素合成基因簇序列；所述的暹罗芽孢杆菌JFL15基因组的全基因组序列的GenBank登陆号为LFWQ00000000.1，所述的表面活性素合成基因簇序列在LFWQ00000000.1中的位置为1904569-1937107；
（2）用
（3）利用ExoCET的方法，将双酶切获得的表面活性素合成基因簇DNA与p15A-Cm-HA在体外经过T4 DNA聚合酶退火后，转入带有重组系统的GB05-dir菌株体内进行重组，获得重组质粒pWG-SRF，同时获得包含重组质粒pWG-SRF的重组菌，记为GB05-dir/pWG-SRF；所述的p15A-Cm-HA的序列如SEQ ID NO：1所示；
（4）从GB05-dir/pWG-SRF中提取重组质粒pWG-SRF，将重组质粒pWG-SRF转化到大肠杆菌野生型菌株BW25113，获得所述的产表面活性素的大肠杆菌工程菌。
2.根据权利要求1所述的产表面活性素的大肠杆菌工程菌的构建方法，其特征在于：
步骤（1）中，利用antiSMASH分析暹罗芽孢杆菌JFL15基因组。
3.根据权利要求1所述的产表面活性素的大肠杆菌工程菌的构建方法，其特征在于：
步骤（2）中，表面活性素合成基因簇DNA的片段大小为32539 bp。
4.根据权利要求1所述的产表面活性素的大肠杆菌工程菌的构建方法，其特征在于：
步骤（3）中，带有重组系统的GB05-dir菌株为带有pSC101-BAD-ETgA-tet的GB05-dir菌株，记为GB05-dir/pSC101-BAD-ETgA-tet。
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