[发明专利]一种LNA-Taqman-多重荧光PCR技术及其在念珠菌快速检测中的应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种基于LNA‑Taqman‑多重荧光PCR及其在念珠菌检测中的应用。本发明的特异性扩增引物和LNA‑Taqman探针的体系，能够快速扩增检测女性生殖道中常见念珠菌，相较于传统检测手段，提高了检测效率、灵敏度、特异性和多重检测率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种基于LNA-Taqman-多重荧光PCR技术及其在女性生殖道分泌物中念珠菌的快速检测中的应用。

背景技术

阴道酵母菌感染，也称为念珠菌性阴道炎和阴道鹅口疮，是由于念珠菌过度生长所致。这些酵母菌通常少量存在于阴道中。最常见的症状是阴道瘙痒，其他症状包括排尿时灼痛，浓厚的白带，症状往往在妇女临产前恶化。大约75％的女性在生命中的某个时刻至少感染一种阴道酵母菌，而近一半的女性至少感染了两种。大约5％的人一年内感染三种以上。这是继细菌性阴道病之后第二大最常见的阴道炎症原因。

虽然白色念珠菌是与阴道鹅口疮相关的最常见的酵母菌，但其他类型酵母菌的感染也会产生类似的症状。一项对370例经确认的阴道酵母菌感染患者的研究确定了以下类型的感染：白色念珠菌(85.7％)、非白色念珠菌(13.2％)、其它(1.1％)。非白色念珠菌常在复杂的阴道鹅口疮病例中发现，其中一线治疗无效。这些情况在免疫力低下的人中更可能发生。

目前，根据我国行业标准“SN/T 2801-2011；传染性念珠菌病检疫技术规范”中的指示，念珠菌性阴道炎和引导鹅口疮通常通过以下三种方式之一进行诊断：阴道湿式显微镜，微生物培养和抗原检测。这些传统的鉴定方法通常需要专业人员和较长的检测时间，并且易受人为因素影响，造成准确度不高等情况，不利于疾病的早期治疗。

TaqMan-多重荧光PCR技术是一种以核酸扩增技术为基础的分子生物学诊断技术。该技术具有耗时短、特异性强、灵敏度高、实时检测、等优势，在需要早期诊断及及时治疗等临床应用中提供更可靠的帮助。目前，已在我国拿到CFDA医疗器械注册证的用于念珠菌检测的产品主要采用传统型荧光PCR检测手段，这种手段仍有检测灵敏度及检测特异性提升的空间。

为进一步提高检测的效率和准确性，本领域仍在寻找能够更快速、准确检测女性生殖道念珠菌的检测方法。

鉴于此，提出本发明。

发明内容

本申请的目的之一是寻求一种检测效率和检测准确性都显著提高的针对女性生殖道念珠菌的检测方法；

本申请的目的之二是寻求一种检测效率和检测准确性都显著提高的针对女性生殖道念珠菌检测的试剂/试剂盒。

为实现上述目的，本发明提供了一种基于LNA-Taqman-多重荧光PCR技术，该技术将锁核酸(LNA)技术、Taqman探针检测技术和多重PCR技术等技术进行组合，建立了用于女性生殖道念珠菌的核酸扩增试剂；利用该试剂可以在一个反应管中扩增生殖道中常见的五种念珠菌，完成对白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌和克柔念珠菌的多重实时荧光检测，实现对女性生殖道念珠菌的特异性区分检测。

具体的，本发明首先提供一种PCR扩增引物和LNA-Taqman探针组，所述PCR扩增引物和LNA-Taqman探针组包含：针对白色念珠菌的SEQ ID NO.1的引物/LNA-Taqman探针、针对光滑念珠菌的SEQ ID NO.2的引物/LNA-Taqman探针、针对热带念珠菌的SEQ ID NO.3的引物/LNA-Taqman探针、针对近平滑念珠菌的SEQ ID NO.4的引物/LNA-Taqman探针、针对克柔念珠菌的SEQ ID NO.5的引物/LNA-Taqman探针。

进一步的，所述PCR扩增引物和LNA-Taqman探针序列如下：