[发明专利]人POLE基因突变的新型测定方法及试剂

权利要求书

1.一种检测POLE基因多位点突变的试剂盒，所述突变包括POLE基因第857、890、1100、1231、1270、1307、1331、1366、1376位突变；该试剂盒中包括：

(1)扩增POLE基因的所述突变位点区域的特异性前引物和后引物，所述的特异性前引物和后引物扩增包含基因突变位点在内的扩增产物的长度为50～200bp；所述特异性前引物或后引物与突变型基因位点及邻近序列互补，较佳地前引物或后引物3’末端碱基与相应突变位点碱基互补；

(2)特异性针对扩增产物的探针，所述的探针携带可检测标记；

(3)Block引物，其靶向结合POLE基因突变位点对应的野生型位点，所述POLE基因突变位点为857、890、1100、1231、1366、1376。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述POLE基因多位点突变包括：c.857CG、c.890CT、c.1100TC、c.1231GT、c.1231GC、c.1270CG、c.1270CA、c.1307CG、c.1331TA、c.1366GC、c.1376CT。

3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述Block引物包括：SEQ ID NO:3，SEQID NO:6，SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:14，SEQ ID NO:28，SEQ ID NO:31所示核苷酸序列的Block引物。

4.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述的可检测标记是荧光标记；和/或

所述的特异性前引物的长度为10-25bp；较佳地为15-22bp；和/或

所述的特异性后引物的长度为10-25bp；较佳地为15-22bp。

5.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，对于第857位突变，前引物和后引物分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的引物；

对于第890位突变，前引物和后引物分别为SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的引物；

对于第1100位突变，前引物和后引物分别为SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示核苷酸序列的引物；

对于第1231位突变，前引物为SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示核苷酸序列的引物，后引物为SEQ ID NO:13所示核苷酸序列的引物；

对于第1270位突变，前引物为SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:17所示核苷酸序列的引物，后引物为SEQ ID NO:18所示核苷酸序列的引物；

对于第1307位突变，前引物和后引物分别为SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示核苷酸序列的引物；

对于第1331位突变，前引物和后引物分别为SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24所示核苷酸序列的引物；

对于第1366位突变，前引物和后引物分别为SEQ ID NO:26和SEQ ID NO:27所示核苷酸序列的引物；和/或

对于第1376位突变，前引物和后引物分别为SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:27所示核苷酸序列的引物。

6.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，对于第857位突变，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；

对于第890位突变，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；

对于第1100位突变，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；

对于第1231位突变，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:15所示；

对于第1270位突变，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示；

对于第1307位突变，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:22所示；

对于第1331位突变，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:25所示；

对于第1366位突变，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:29所示；和/或

对于第1376位突变，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:29所示。