[发明专利]一种快速检测新型冠状病毒N501Y突变的引物组合物及试剂盒

说明书

本发明提供了一种快速检测新型冠状病毒N501Y突变的引物组合物及试剂盒，该引物组合物包括引物组和PNA探针；该PNA探针的序列如SEQ ID NO：7所示；该引物组包括F3引物、B3引物、FIP引物、BIP引物、以及LB引物或LF引物，选自包括序列如SEQ ID NO：2～6的组合物、包括序列如SEQ ID NO：3、5和8～10的组合物、包括序列如SEQ ID NO：11～15的组合物和包括序列如SEQ ID NO：16～20的组合物的一组或者几组。本发明基于LAMP技术开发了一种快速检测新型冠状病毒N501Y突变的引物组合物及试剂盒，特异性好、灵敏度高，无需复杂、昂贵的辅助设备，在30‑60min内即可实现核酸分子标志物的快速检测，检测结果可以通过目视法直接判断，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种快速检测新型冠状病毒N501Y 突变的引物组合物及试剂盒。

背景技术

冠状病毒(Coronavirus，CoV)，因其包膜表面有一圈形似日冕的棘突而得名，广泛存在于自然界中，是一种呼吸道病毒，其宿主包括人类、脊椎动物和无脊椎动物。冠状病毒属套氏病毒目，冠状病毒科，冠状病毒属，为有包膜的正股单链RNA病毒，直径为80～120nm，约有3万个碱基组成，其遗传物质是已知 RNA病毒中最大的。国际病毒分类命名委员会在2012年根据其遗传学差异和血清学特性将冠状病毒分为α、β、γ、δ四群，其中β群CoV又进一步分为A、B、 C、D四个组。α、β两群易感染哺乳动物，包含了7种对人类致病的冠状病毒，分别为HCoV-OC43、HCoV-229E、SARS-CoV、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、 MERS-CoV和SARS-CoV-2；而γ、δ两群则主要感染禽类。冠状病毒是一种常见的、易引发呼吸道疾病的病原体，在引起成人社区获得性肺炎的病毒中，冠状病毒检出率与其他呼吸道病毒的检出率相似。SARS-CoV-2感染不仅会对人类的生命安全构成威胁，还会对全球社会经济造成极大损失，我们需要“未雨绸缪”，积极应对，对其流行病学和致病机制进行深入研究，积极研发新型特效药和疫苗，并开发出更有效的检测手段，把冠状病毒扼杀于“摇篮”阶段，为人类的健康保驾护航。

N501Y突变是出现的新冠病毒刺突蛋白(spike protein，S蛋白)里的一种氨基酸的变异，即病毒S蛋白第501位的氨基酸残基由天冬酰胺变成酪氨酸。 N501Y突变可能会提高病毒与人体细胞表面ACE2受体的亲和力，增强新冠病毒的传染力，病毒更容易入侵细胞，科学家推测英国出现的突变株传染性提高 70％。因此快速检测SARS-CoV-2，及时了解病毒株的主流突变情况，对于疫情的防控、疾病的诊疗和疫苗的研发等均具有重要的意义。

目前逆转录实时PCR技术被认为是SARS-CoV-2检测“金标准”，然而该技术操作复杂，扩增速度较慢(2-3个小时)，需要在要求较高的实验室内才能进行，所需的检测设备价格昂贵，而且需要训练有素的专业技术人员才能进行检测，导致该技术难以推广，尤其是基础设施薄弱、偏远落后的地区难以推广。而环介导等温扩增技术(LAMP)是利用设计的四对特殊引物和具有连置换活性的 Bst DNA聚合酶(具有链置换特性)，在60-65℃恒温条件下进行特异、高效、快速的扩增靶核酸。但目前未有采用LAMP技术检测新型冠状病毒N501Y突变的报道。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种快速检测新型冠状病毒N501Y突变的引物组合物及试剂盒。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种快速检测新型冠状病毒N501Y突变的引物组合物，包括引物组和PNA探针；该PNA探针的序列如SEQ ID NO：7所示；

上述引物组包括F3引物、B3引物、FIP引物、BIP引物、以及LB引物或 LF引物，选自包括序列如SEQ ID NO：2～6的组合物、包括序列如SEQ ID NO： 3、5和8～10的组合物、包括序列如SEQ ID NO：11～15的组合物和包括序列如 SEQ ID NO：16～20的组合物的一组或者几组。