[发明专利]热适应性改变的菊粉酶突变体MutS120R及其应用

说明书

本发明涉及基因工程及蛋白质改造技术领域，公开了一种热适应性改变的菊粉酶突变体MutS120R及其应用，该突变体MutS120R的氨基酸序列是将野生外切菊粉酶InuAMN8的第120位氨基酸(丝氨酸)突变为精氨酸获得，MutS120R的序列如SEQIDNO.1所示。与野生酶InuAMN8相比，突变体MutS120R的低温活性提高，热稳定性降低，有利于酶的安全性使用和应用于低温环境要求下的生物技术领域。本发明热适应性改变的菊粉酶突变体MutS120R可应用于食品、酿酒和洗涤等行业。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及蛋白质改造技术，具体为热适应性改变的菊粉酶突变体MutS120R及其应用。

背景技术

菊粉主要存在于菊芋、菊苣、蒲公英、牛蒡和朝鲜蓟等植物体的根部或茎部，是一种来源丰富的可再生资源。菊芋价格低廉、产量高，更重要的是菊芋属于非粮作物，这些特点使菊芋的有效利用成为关注的焦点。

菊粉经外切菊粉酶水解，可得到糖含量高达95％的果糖浆。果糖甜度是蔗糖的1.5–2.0倍，并且热量低、风味好，可作为天然甜味剂替代蔗糖；果糖代谢不受胰岛素的制约，可以供糖尿病患者食用；果糖经酵母等发酵后可以用来生产生物乙醇、2,3-丁二醇等。因而，外切菊粉酶可应用于食品、酿酒和生物能源等行业中(Singh RS etal.International Journal ofBiological Macromolecules,2017,96:312～322.)。

低温酶在低温下具有高的催化活性，可应用于低温环境要求下的生物技术领域，如清酒和葡萄酒的发酵温度一般25℃，水产养殖环境、洗涤、污水处理通常在低温下进行。另外，低温下的处理(如果汁澄清)可防止微生物的污染、营养损失和食品品质降低，将中温或者高温处理方式转为低温处理方式还可起到降低能耗的作用(Cavicc hioli etal.Microbial Biotechnology,2011,4(4):449～460.)。因此，提高酶在低温下的催化活性将有利于酶在食品、酿酒和洗涤等行业中的应用。

对热越敏感的酶越容易变性，变性又使酶容易被降解，该特性使酶的催化反应得以简易控制，简单的热处理就可以使酶失活，操作简便又有效，同时使酶的使用更具安全性；热处理还可以有效防止微生物的污染。因此，获得热敏感的突变酶，将有利于酶在食品、酿酒和洗涤等行业中的应用。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种热适应性改变的菊粉酶突变体MutS120R，可应用于食品、酿酒和洗涤等行业。

为了实现该技术目标，本发明具体通过以下技术方案实现：

热适应性改变的菊粉酶突变体MutS120R，所述的突变体MutS120R的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。与GenBank记录的外切菊粉酶序列AGC01505(SEQ ID NO.3)相比，MutS120R的第120位氨基酸为精氨酸，而AGC01505的120位氨基酸为丝氨酸。

所述突变体MutS120R的最适温度为30℃，在0℃、10℃、20℃和40℃时分别具有17％、34％、57％和67％的活性；50℃处理60min后，MutS120R剩余65％的酶活；在酶促反应体系中添加5.0～30.0％(w/v)的NaCl，MutS120R的活性从84％降到11％；经5.0～30.0％(w/v)的NaCl处理60min后，MutS120R的酶活几乎无损失；MutS120R可水解菊粉产生果糖。

本发明提供了所述的菊粉酶突变体MutS120R的编码基因mutS120R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明的另一目的在于提供一种包含所述菊粉酶突变体的编码基因mutS120R的重组载体。

本发明的另一目的在于提供一种包含所述菊粉酶突变体编码基因mutS120R的重组菌。