[发明专利]一种TERT启动子甲基化的检测引物组合物及其应用

说明书

本发明提供了一种TERT启动子甲基化的检测引物组合物及其在肾癌检测中的应用。本发明利用所述的引物组合物，通过焦磷酸测序技术，可检测TERT启动子cg11625005位点的甲基化水平，进一步对肾癌进行病理分期分级。本发明所述的TERT启动子甲基化水平的检测灵敏度及准确性高，对于肾癌的早期检测、预后和风险评估具有重要的指导意义。

技术领域

本发明涉及分子生物检测技术领域，具体涉及一种TERT启动子甲基化的检测引物组合物及其在肾癌检测中的应用。

背景技术

肾癌是起源于肾实质的恶性肿瘤，肾癌高发年龄段为50-70岁，在成人恶性肿瘤中占2-3％，位列我国泌尿系统恶性肿瘤发病率的第二位，仅次于膀胱癌，近年其发病率逐步上升。据研究，肾癌术后不同危险度的患者其5年生存率不同，低危患者以90％的比率位居榜首，而高危患者仅为42％，中危患者的62％也不容乐观。由于各种因素影响，我国肾癌患者生存率低于以上数据。肾癌的病因目前并不明确，可能与肥胖、吸烟、高血压及高血压治疗、遗传等因素有关，其中遗传性肾癌占肾癌总数的2-4％。肾癌的发病过程比较隐秘，早期患者常无明显症状，但当患者出现“肾癌三联征”(血尿、疼痛、肿块)时即提示肾癌已发展到晚期，错过了最佳的治疗时期，因此对肾癌的早期诊断和早期治疗显得尤为重要。

肾癌早期并无明显的症状，因其位置较隐蔽，较难发现。肾癌的诊断，除了依据“肾癌三联征”的临床症状外，主要依据影像学检查，包括腹部超声(US)、核磁共振成像(MRI)及X射线计算机断层扫描(CT)。超声检查目前多用彩色超声，可以鉴别肾实质性肿瘤和肾囊性肿块，但是即使超声造影也很难与其它肾脏实质性病变区别；CT是目前肾癌诊断最常用和最重要的手段，理论上可以清晰的显示肾实质瘤的部位、范围、形态，可发现早期癌变的肾脏，增强后肿瘤一般均会强化，且透明细胞癌则类似于肝癌呈现“快进快出”强化方式；MRI可以从各个角度清晰的显示肿瘤的形态，侵犯的范围及粘连程度，主要是对肾癌的分期较明确，另外有助于诊断是否合并癌栓。

端粒酶是一种由催化亚基、端粒酶逆转录酶(telomerase reversetranscriptase，TERT)和RNA组分(telomerase RNA component，TERC)组成的核糖核蛋白复合物，通过维持端粒稳态和染色体完整性而发挥作用。TERT基因编码端粒酶的限速催化亚单位，可维持基因组的完整性。除了生殖干细胞和造血干细胞外，人端粒酶逆转录酶(humantelomerasereverse transcriptase，hTERT)基因在人体正常细胞中不表达，但在肿瘤组织中高表达。有研究表明，hTERT基因参与多种肿瘤的进展，在80-90％的恶性肿瘤中均可检测上调的hTERT基因，其启动子区突变与肿瘤的增殖和侵袭也有密切的联系，如黑色素瘤、神经胶质瘤、甲状腺癌、尿道上皮癌和脂肪瘤等等。除调控端粒酶转录活性之外，TERT基因也可通过与P65、β-catenin等转录因子相互作用等方式调控除端粒酶之外的其他相关基因的表达，并可调控核转录因子(nuclear transcription factor-κB，NF-κB)信号通路和canonical Wnt/β-catenin pathway通路中的某些基因转录程序。

专利CN111560436A公开了一种TERT突变检测试剂盒(C228T或C250T)及其在膀胱癌和肾盂癌无创诊断中的应用。专利CN103571954A公开了一种TERT启动子的单核苷酸多态性序列及其在检测膀胱移行细胞癌或上尿路上皮细胞癌中的应用。然而在很多肿瘤中，如肾癌、骨肉瘤和宫颈鳞癌等肿瘤中TERT启动子区域突变相对罕见，TERT启动子突变频率很低，因此基于TERT启动子突变的检测方法存在一定的局限性。《TERT基因启动子区甲基化在胃癌发生发展中的作用研究》(蔡中瑞，沈建康，陈舟侃，王天翔.中国医学工程.第23卷第6期，2015年6月)探讨了TERT基因启动子区甲基化水平在胃癌组织与癌旁组织中的差异，并分析TERT基因启动子区甲基化与胃癌组织病理分化、神经转移、浸润深度、TNM分期等临床病理学参数的关系。但并无报道TERT基因启动子区甲基化与肾癌有无关系。

因此，寻找新的TERT上的DNA标记物对肾癌的诊断和预后评估有重要的作用。