[发明专利]一种鉴别草地贪夜蛾性别的分子标记及其应用

权利要求书

1.一种草地贪夜蛾性别差异性分子标记，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；其中，含有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列为雌性，含有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列为雄性。

2.根据权利要求1所述的草地贪夜蛾性别差异性分子标记，其特征在于：所述的SEQ IDNO：1和SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列采用PCR引物检测，根据PCR检测结果鉴定草地贪夜蛾的性别。

3.根据权利要求2所述的草地贪夜蛾性别差异性分子标记，其特征在于：

所述的PCR引物如SEQ ID NO：3～5所示。

4.一种鉴别草地贪夜蛾性别的分子标记引物组，其特征在于：所述的分子标记引物组包括雌性特异性引物组和雄性特异性引物组；其中，

雌性特异性引物组由SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4组成；

雄性特异性引物组由SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：5组成。

5.一种鉴别草地贪夜蛾性别的试剂盒，其特征在于：含有权利要求4鉴别草地贪夜蛾性别的分子标记引物组。

6.权利要求1～3任一项所述的草地贪夜蛾性别差异性分子标记，权利要求4所述的鉴别草地贪夜蛾性别的分子标记引物组以及权利要求5所述的鉴别草地贪夜蛾性别的试剂盒中的至少一种在草地贪夜蛾的性别鉴定中的应用。

7.一种鉴别草地贪夜蛾性别的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)提取基因组DNA

提取待测草地贪夜蛾的基因组DNA；

(2)PCR扩增

以提取的基因组DNA为模板，利用权利要求4所述的鉴别草地贪夜蛾性别的分子标记引物组中的SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4，以及SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：5分别进行扩增，得到PCR扩增产物；

(3)结果判断

①采用琼脂糖凝胶电泳对PCR扩增产物进行检测：若用SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的引物扩增得到452bp的电泳条带，则为雌性草地贪夜蛾；若用SEQ ID NO：3和SEQ IDNO：5所示的引物扩增得到456bp的电泳条带，则为雄性草地贪夜蛾；

和/或：

②对PCR扩增产物进行测序：若用SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的引物扩增得到如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，则为雌性草地贪夜蛾；若用SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：5所示的引物扩增得到如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列，则为雄性草地贪夜蛾。

8.根据权利要求7所述的鉴别草地贪夜蛾性别的方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的草地贪夜蛾为性别已知或未知的草地贪夜蛾的虫蛹、幼虫或成虫。

9.根据权利要求8所述的鉴别草地贪夜蛾性别的方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的草地贪夜蛾为性别未知的草地贪夜蛾幼虫或鳞羽掉落的草地贪夜蛾成虫。

10.根据权利要求8所述的鉴别草地贪夜蛾性别的方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的PCR扩增的体系为15μL扩增体系：Primer STAR Max 6.25uL，10μM的分子标记引物组的引物各0.5μL，基因组DNA 0.5μL，加ddH2O至15μL；

步骤(2)中所述的PCR扩增的反应程序为：98℃预变性2min；98℃变性10S，58℃退火30S，72℃延伸30S，35个循环；72℃延伸5min。